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摘要:考察不同工艺条件下硫酸软骨素获得高产条件以及发酵条件的优化。发酵培养基中碳源、 氮源及无机盐等因素及各种发酵条件对枯草芽孢杆菌产硫酸软骨素的影响，获得硫酸软骨素最佳发酵培养基和发酵条件。采用单因素实验法。本实验采用微生物发酵法和传统方法酶碱微波法提取硫酸软骨素，并对微生物发酵法培养基等实验条件进行优化，进而比较2种方法的不同处和优点。
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主要研究结果如下：6766
（1）.获得的最优培养基配方（g/L）为:蔗糖4，牛肉膏0.8，蛋白胨1，MgSO4•7H2O 0.03，K2HPO4•3H2O 0.3。
（2）最适发酵条件为：28℃，24h，pH 7.0。在优化条件下，硫酸软骨素含量最高。
（3）2种方法在530nm处测得吸光度相比较对照，传统法所测含量浓度要比微生物发酵法高，在10~50ug/ml服从线性方程。
（4）葡萄糖醛酸标准曲线所得回归方程为Y=0.015X-0.037(r=0.9997)。
关键词：硫酸软骨素；枯草芽孢杆菌；培养基；咔唑；猪软骨；木瓜蛋白酶
The fermentation craft research of Chondroitin sulfate
Abstract: Inspect chondroitin sulfate yield conditions under different process conditions and the optimization of fermentation conditions.Ermentation medium carbon source, nitrogen source and inorganic salts etc and all kinds of fermentation conditions on bacillus subtilis of chondroitin sulfate, chondroitin sulfate best fermentation medium and fermentation conditions. Using single factor experiment method.
（1）The optimal culture medium formula (g/L):Sucrose 4, beef extract 0.8, peptone 1, MgSO4•7 H2O 0.03， K2HPO4 • 3 H2O 0.3。
（2）The optimum fermentation conditions for: 28 ℃, 24 h, PH 7.0。Under optimized conditions, chondroitin sulfate content in the highest.
(3)Two methods is measured at 530 nm absorbance, compare and contrast the traditional method of the test content is high concentration than the microorganism fermentation, and in the 10 ~ 50 ug/ml to obey linear equation.
(4)Glucuronic acid standard curve obtained regression equation Y = 0.015 X - 0.037 (r = 0.9997)
Keywords: Chondroitin sulfate; bacillus subtilis; culture medium;carbazole; the pig cartilage;papain
目录
1引言..1
1.1 硫酸软骨素的概述.9
1.1.1硫酸软骨素的结构和性质..12
1.1.2 硫酸软骨素的作用..13
1.2硫酸软骨素的生产工艺..14
1.2.1动物软骨中提取.14
1.2.2微生物发酵法.14
1.3本课题研究的目的与意义.14
2实验材料和方法..14
2.1采用的实验材料.14
2.1.1枯草芽孢杆菌..15
2.1.2咔唑试剂..15
2.1.3猪软骨15
2.1.4木瓜蛋白酶.15
2.1.5主要仪器..15
2.2采用的实验方法.16
2.2.1发酵法16
2.2.1.1枯草芽孢杆菌培养基.16
2.2.1.2枯草芽孢杆菌扩培..17
2.2.1.3枯草芽孢杆菌平板稀释涂布结晶紫.17
2.2.1.4测定硫酸软骨素含量.17
2.2.1.5第二次硫酸软骨素的扩培..18
2.2.1.6培养基的优化.18
2.2.1.7发酵条件的优化19
2.2.2猪软骨中提取,19
2.2.2.1CS的制备20
2.2.2.2CS的含量测定方法..20
2.3数据统计与分析20
3.结果与讨论21
3.1枯草芽孢杆菌涂布结晶紫21
3.2菌株的删选22
3.3葡萄糖醛酸标准曲线,,22