gpr177在舌头发育中的功能研究

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摘要目的：观察Gpr177缺失引起的舌头发育缺陷，研究其在舌头发育过程中的表达方式，并比较Gpr177突变体与正常的野生型的舌头的形态学和组织学特征，进一步测定突变体舌头中受Gpr177缺失而引起的细胞的增殖和凋亡情况；方法：通过特定的小鼠交配路线获得特定品系的小鼠、从小鼠胚胎中抽提基因组DNA、使用PCR进行基因扩增并进一步鉴定基因型、胚胎的石蜡切片、RNA原位杂交等；结果：我们发现在Gpr177在小鼠舌头发育过程中的舌头表皮，间充质和肌肉组织都有表达；并初步的对E12.5时期舌头的细胞增殖水平进行BrdU标记分析，并且通过TUNEL染色的方法检测了Gpr177的突变体小鼠胚胎舌头和野生型的细胞死亡情况，发现细胞死亡不是造成舌头突变体缺陷型的生物学原因。44149

Abstract Objective: To observe the defects of tongue development caused by Gpr177 deletion. Compare the morphological and histological characteristics between Gpr177 mutant and normal wild type tongues.Further examine the changes in ell proliferation and cell apoptosis in tongue loss of Gpr177.Method:Cross Gpr177fx/fx mice and shhcre mice to get Gpr177 conditional knockout mice by shh-cre.Genomic DNA was extracted from tails of embryos and subjected to PCR analysis to distinguish the mutant embryos form wild-type embryos.,We also used other methods in this project, including paraffinsection,RNA in situ hybridization. Result: Gpr177 is expressed in epithelium, mesenchyme and muscle of developing tongue. We also checked the cell proliferation of E12.5 tongue using BrdU staining. In addition, we compared the cell death level between Gpr177 mutant and wild-type tongues, and found that cell death is not the biological reason that caused the tongue defect in Gpr177 embryos.

毕业论文关键词：Gpr177； Wnt家族蛋白；小鼠；舌头发育；基因表达

Keyword:Gpr177； tongue；Wnt；mice; genetic

一、引言： 4

二、实验内容： 5

2.1 分析Gpr177和Wnt信号在小鼠胚胎舌头发育过程中的时空表达 5

2.2交配小鼠得到特定品系的小鼠，收集Gpr177条件性敲除的胚胎。 6

2.3 利用Brdu标记法以及TUNEL法分别测定突变胚胎舌头中细胞增殖和细胞凋亡情况，以确定造成舌头缺陷型的生物学原因 6

三、实验结果讨论： 9

3.1免疫组化实验结果： 9

3.2 Brdu实验结果： 10

3.3TUNEL实验结果： 12

一、引言：

人类舌头部位存在多种遗传疾病，包括小舌症、无舌诊、觉失调等等，要解决问题，其前提就是深入了解的遗传分子机制，具有重大的科学意义和医学价值。

人类舌头的发育过程和小鼠相似，都由舌头表皮组织和相邻间充质以及肌肉组织的相互作用所调节。包含了细胞增殖、细胞分化、细胞迁移以及细胞凋亡等一系列生物学过程，这些过程均受多种家族的细胞生长因子、信号分子以及转录因子等组成的复杂信号通路网络调节。这些分子的基因缺陷经常会让小鼠形成不同程度。

Wnt信号分子家族是一大类分泌型糖蛋白，其从细胞中分泌出来，和细胞表面受体相结合，并激活细胞内一系列信号通路，在发育的多种过程包括细胞迁移、细胞增殖、细胞凋亡以及细胞命运决定等过程起重要作用[2]，因此，有关Wnt信号通路的研究一直都是生物医学和发育生物学的热点。Wnt信号通路主要分为依赖β-catenin的经典Wnt信号通路，和不依赖β-catenin的非经典Wnt信号通路。β-catenin是经典Wnt信号通路的中心蛋白，在不存在Wnt蛋白时，β-catenin会被GSK3β，Axin和APC复合体锚定并降解，但是在有Wnt信号蛋白存在的情况下，Wnt与其受体结合会导致β-catenin降解复合体被解体，使β-catenin得以累积并进入细胞核调控基因表达。