细胞的有丝分裂,这是一个周期性的变化过程,通过细胞的形态变化,尤其是染色体的数目、形态、位置变化,可以人为地划分为几个时期,因此进行比较和研究。在一般状态下,一大批处于各个分裂期的细胞混在一起。这就需要必须很细心的观察,找出带有有丝分裂各个时期典型的形态特征的细胞,并得出这些细胞属于哪几个时期的结论。植物的分生组织细胞是可以通过有丝分裂增加其数目。为了看清楚染色体或染色质,就要用碱性染料将其染色。
细胞的有丝分裂在染色体数量的维持上有重要意义。通过有丝分裂生成的两个子核都同时拥有与母核数量相同的染色体。
“观察植物根尖分生组织细胞的有丝分裂”是一个比较经典的,能清楚的观察到细胞有丝分裂各个时期染色体变化的实验。我们一般能够通过该实验来加深对细胞有丝分裂过程的理解。但是这个实验也是我们高中时期所学的必修课程中必做的十几个实验中最难成功的实验类之一。
随着生物技术的不断改进,对研究植物有丝分裂的实验有了更高的要求以及做出了更多加强和修饰。对取材、固定、解离、染色、压片等过程进行了严格完善。因此需要找到哪些因素影响制片的完整度,染色体组型的清晰度以及分裂相的数目。下面研究的项目为其中一项对大蒜染色体制片技术的影响,期望找到最佳的染色时间对制片的影响,同样也为植物根尖分生组织细胞的压片技术提供帮助。
1.大蒜对植物遗传学有丝分裂研究的作用和联系
1.1植物根尖各组织的的介绍
根毛组织—细胞停止伸长,胞内有比较大的液泡,某些细胞的细胞质和细胞核消失不见。主要作用是根吸收生命所需的营养成分的主要部位。
伸长组织—主要是生长比较速度,胞内的较小液泡使细胞体积变大,促进根的伸长。
分生组织—较小的、排列紧密的、细胞壁薄的、细胞核大的并且有大密度的细胞质的组织,胞内没有液泡存在。主要是有分裂能力的顶端分生组织 。
根冠组织—由薄壁细胞组成,细胞排列不规则,细胞内含淀粉体与根的向地性生长有关。起保护根尖幼嫩分生组织的,避免与土壤磨损的作用。
高等植物根尖组织的整体结构:一般都会如上所述,其中只有分生组织的细胞处于有丝分裂之中,因此作为我们的实验目标,进行研究时应该剪去植物根尖的其他组织来保证观察效果。
1.2植物分生组织的主要作用
真核生物体细胞增殖一般主要通过有丝分裂来进行;高等植物有丝分裂发生在根尖、茎尖及幼叶等分生组织;核内染色体准确复制、同等分裂;子、母细胞在遗传物质组成上等质同量;维持植物的正常生长发育,保证物种性状的连续性和稳定性。
生物体细胞的染色体数目和结构是重要的遗传标志。所以深入探讨染色体的结构和功能,对生物的遗传、突变、进化以及细胞的增值,个体的生殖过程都具有非常重要的意义。每个物种的细胞都有一定数目、形状、大小的染色体特征,过程为染色体组型,因此研究染色体性状,制备染色体标本为研究细胞遗传学最重要的步骤,成功制备的染色体标本是其他技术研究的开始。
1.3植物分生组织细胞对遗传学寄予的贡献
由Flemming W发现细胞核的分裂,染色体纵裂为二的现象,导致遗传物质染色体的出现,后来Waldeyer W给这种纵裂分为二的物质取名为染色体(Chromosome)。研究染色体数目、结构、行为与遗传变异的关系的细胞遗传学和细胞分类学的发展,Belling发明的乙酸洋红染色压片法作出了极为巨大的贡献。但是因为植物胞壁很坚实,染色体很难分散开,很难像动物染色体那样平整的贴在载玻片上。1982年陈瑞阳提出了植物染色体标本制备的酶解去壁低渗法,并且应用在多种植物材料上,成为当前植物染色体研究中的重要方法。自从Giemsa带型技术的应用于植物染色体领域研究以来,因为其结果明显改善、成本低等优点,此技术已被广泛地运用于染色体的核型分析,如C-带、N-带、G-带等,为植物染色体遗传学的更加完善发挥了较为重要的作用。Gall等创建的DNA分子原位杂交技术,发展成可对DNA片段甚至整个基因组进行准确定性、定位和相对定量的研究,让染色体的研究由细胞水平进入分子水平。植物染色体压片技术在染色体组型、核型分析及原位杂交,染色体数目统计等实验中相当重要的研究之一。我们常用的植物细胞染色体制片方法包括常规压片法、Feulgen核反应染色法和酶解去壁低渗法,这些方法各有各的特点