益生菌的筛选及稳定性提高研究(2)

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4.3储藏稳定性试验结果 8

4.4释放试验结果 10

4.5模拟胃液稳定性试验结果 11

4.6胆盐稳定性试验结果 11

5 讨论 12

参考文献 12

致谢 14

抗生素作为一种抗菌剂，对致病菌就有很好的抑制作用。因此，动物饲料中添加抗生素是一种促进动物生长及抑制有害菌繁殖的常见方法。但是随着抗生素的滥用，其危害性日益突出，抗生素耐药性问题已成为当今的争议焦点[1]。因此，人们迫切需要新的替代品以取代抗生素在动物防病及促生长方面的作用，减少甚至取代抗生素的应用。众所周知，益生菌具有很多优良的促进健康性能：（1）益生性：肠球菌具有帮助消化，改善肠道菌群，调节免疫系统，降低胆固醇甚至于抵抗癌症等益生功效，双歧杆菌等已成功应用于医疗保健行业。（2）抗菌性:一些益生菌自身还可合成一种细菌素，具有抑菌活性，可以抑制肠道病原菌与衣原体、寄生虫等微生物，还具有零污染、零残留的、无耐药性的特点，使其能很好的代替抗生素。我国农业部已规定可以将肠球菌应用到动物肠道疾病的治疗中，已有很多益生菌剂药物投入使用[2-3]。近年来以益生菌为代表的微生态制剂正是以其无毒、无害、无残留、绿色环保等优势成为人们的首选。

但是益生菌因其活菌制剂的生理特性，在生产、加工、运输、储存的过程中容易失活；而且制剂作用部位多为生物肠道，胃液、胆汁等物质都会对菌体产生不利影响，资料显示，只有摄入含有不低于106 CFU/mL的益生菌才能充分发挥其健康促进性[4]。因此如何提高其稳定性对益生菌的应用具有一定的意义。各国研究者们都在研究菌体稳定性增效技术，包括预培养、筛选抗性菌株、添加保护剂和包埋。而利用微胶囊技术包埋益生菌是其中最有效且应用最广泛的一种[5]。

肠球菌作为一种重要益生菌在国内研究较少，肠球菌为兼性厌氧的革兰氏阳性球菌。在80年代之前，一直被认为是链球菌属中的一员，直到1984年，Devriese和pot等人利用新的细菌分类技术发现肠球菌与链球菌的差异，将肠球菌从中分离出来，形成了一个新的独立的肠球菌属[6]。当时由粪肠球菌与屎肠球菌两个菌种组成。到目前为止，已扩展为37个种，根据16SrRNA基因相似性测试可分为7个种组[7]。肠球菌来源广泛，主要存在于脊椎动物及人类的肠道中，也可从乳制品与发酵食品中分离得到 [8-9] 。

本课题以植物蛋白大豆蛋白与海藻酸钠混合物为包埋壁材，利用微胶囊技术对肠球菌进行包埋，主要对其模拟胃液稳定性、模拟胆汁稳定性、储存稳定性和释放性能进行检测，以期提高肠球菌的稳定性。

1 微胶囊技术概述

1.1微胶囊技术简介

微胶囊技术是用可以成囊壁或膜的物质对固体、液体或气体等核心物质进行包埋和固化形成微胶囊。这种技术不仅能在加工储存过程中给予益生菌一定的保护，而且包埋体系能够控制菌体的释放，使其准确到达作用部位[10]。

1.2微胶囊壁材研究

（1）蛋白质

蛋白质因其具有形成致密的凝胶的优良功能特性，已成为一种良好的益生菌包埋壁材。蛋白质还具有良好的生物兼容性，其致敏性很低，尤其适合于食品制造业[11]。但是也有研究结果表明蛋白质作为包埋壁材也存在一定的缺点，（1）易被蛋白酶水解，使其在经过胃时壁材崩解，从而丧失了对菌体的保护作用 [12]。（2）蛋白质微胶囊易粘连在一起，很难被分开，导致胶囊很难称量。（3）蛋白质交联能力低，运用挤压法固定时所需CaCl2的浓度很高，而Ca离子浓度过高易导致菌体的死亡。