2.3.2拟南芥的种植(无菌)
(1) 超净台紫外灭菌:于超净台中放入烧杯,灭菌水(之前灭菌的双蒸馏水),一次性枪头(已灭菌),医用胶带等进行紫外灭菌30min
(2)消毒:选择饱满的5种拟南芥种子,分别放入1.5ml离心管中,用记号笔做好标记种子类型。用无菌水浸泡20分钟,用75%酒精溶液消毒离心管外表面后,入超净工作台用50% bleach消毒液 (商业用立白漂白水与无菌水1:1混合) 浸泡且摇动3-5 min,使拟南芥种子表面充分消毒; 时间不可超过10min,不然种子会被杀死。
(3)清洗:5min后,倒出消毒液,用无菌水漂洗4—5次,每次2-3分钟;
(4)播种:将消毒完的种子用枪头吸取,然后点播种于MS固体培养基上,注意不要戳破培养基。播种结束后利用医用胶带封口培养皿,并将封口处靠近酒精灯火焰旋转一圈,达到进一步灭菌和加强医用胶带的封口效果。用记号笔在培养皿上标记所播种子类型。
(5)春化:将播种后的培养皿置于4℃冰箱中春化48h;
(6)培养:将春化后的种子放入培养室,培养室温度22-25℃,16 h光照8 h黑暗,光照强度为100-150umol/m2s;