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    2 主要材料

    2.1 主要试剂

    1) 对二甲苯:上海生工生物

    2) 绒促性素(HCG):宁波第二激素厂

    3) 3-氨基-苯甲酸乙酯(MS222):意大利Sigma-Aldrich公司

    4) 10X Steinberg’s Stock:实验室配置

    5) 葡萄糖醛酸内酯:阿拉丁

    2.2 主要仪器

    1) 连续变倍体视显微镜:苏州欧米特光电科技有限公司

    2) 恒温培养箱:福意联,北京福意电器有限公司  

    3) 爪蟾视觉逃避行为密闭装置(自组装)

    2.3 试剂的准备

    1) 10X Steinberg’s Stock:119g 缓冲液,34g盐,2.06g硫酸美,o.8g硝酸铵钙,0.5g氯化钾,1升水调制pH至7.5

    2) 3-氨基-苯甲酸乙酯:500mL Steinberg’s Solution和0.1g 3-氨基-苯甲酸乙酯粉混匀,调节pH至7.4。

    3 主要方法

    3.1 爪蟾的饲养

    成年非洲爪蟾购自美国NASCO公司,雌雄成年爪蟾饲养在去氯自来水的爪蟾养殖系统内,水温大约在20℃左右[10],明暗光照周期为12h:12h,每周喂1次猪心和1次合成饲料。

    3.2 PX的制备

    PX的浓度为0.861g/ml,稀释1000倍后,在通风厨内用移液枪吸取400ul的PX母液放入装有399.6ml双蒸水的棕色瓶中。配制成400ml的溶液备用。

    3.2.1蝌蚪培养

    在成年雌雄蛙体内分别注射HCG,雌性爪蟾注射1000单位HCG,雄性爪蟾注射500单位HCG,放在一个水箱内进行配对。受精的卵母细胞孵化后第五天开始选择活动状态良好的蝌蚪80只作为实验材料备用。

    3.2.2 PX溶液对蝌蚪的培养

    随机分成4组,设置实验组和对照组。其中1为对照组,2、3、4为实验组,各组20只蝌蚪。实验用挑选的体表无损、活力良好且尾巴未受损的20只健康的蝌蚪放置                                                                  于对二甲苯浓度分别为0、1、2、2.5mM的环境下培养7天, 观察蝌蚪生长状况:包括每组蝌蚪畸变数目、每组存活数目和死亡数目以及行为学数据统计,以探讨不同浓度对二甲苯对蝌蚪生长发育的影响

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