- 上一篇：水分胁迫下不同小麦品种幼苗生长特性的研究
- 下一篇：不同光质对菊花心幼苗品质的影响
本研究通过建立高效多菌灵降解菌株djl-10的基因文库，为研究djl-10基因组结构功能及降解多菌灵相关基因奠定基础。
2 材料与方法
2.1 培养基与试剂
基础培养基（MSM）组成：NaCl 1.0g，NH4NO3 1.0g，K2HPO4 1.5g KH2PO4 0.5g，MgSO4 ·7H2O 0.2g，去离子水1000mL，pH7.0。
LB培养基的组成：蛋白胨（OXID）10g，酵母粉（OXID）5g，NacL l5g，去离子水1000mL，pH自然。固体LB培养基加入15g/L琼脂粉。
试剂：Amp抗生素购自Amresco，回收试剂盒购自AXYGEN公司，内切酶BamHI，T４DNA连接酶，各种载体购自宝生生物工程（大连）有限公司。
2.2 供试菌株
实验室保存的一株多菌灵高效降解菌株djl-10，该菌为前期研究中从多菌灵废水处理系统活性污泥中分离获得。
2.3 主要仪器
超净工作台，DYY-6C型电泳仪，电热恒温振荡水槽，全温振荡培养箱，离心机，摇床等。
2.4 菌株基因组文库的构建
2.4.1 菌株基因组DNA的提取
取100mL的菌体培养液12000g，5min离心，50mL TE（pH8.0）重悬，洗涤并离心；加溶菌酶至100µg/mL终浓度，37℃过夜至体系变清；在上述澄清体系中加入1.5mL 10% SDS和150µL的蛋白酶K，混匀，于37℃温育1h；加入5mL 5mol/L Nacl，充分混匀，加入4mL CTAB/Nacl溶液，混匀后再65℃温育10min；加入等体积的酚/氯仿/异戊醇剧烈震荡抽提，12000g，5min离心，将上清转入一只新管中；重复上一步骤几次，直至不出现白色界面；加入等体积的异丙醇，轻轻混匀，直到DNA沉淀下来，用烧成钩状的玻璃毛细管捞起DNA沉淀；DNA沉淀用70%的乙醇洗涤几次，置于洁净工作台中风干；用适当体积的TER缓冲液溶解DNA，准备电泳检测。