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摘要： 精氨酸酶是尿素循环过程中的一种重要的酶，它可以催化精氨酸水解产生鸟氨酸和尿素，在生物体的氮代谢方面有着很重要的作用，同时，精氨酸酶可以通过分解精氨酸对肿瘤细胞进行营养剥夺，是一种良好的抗肿瘤药物。转基因工程菌种的精氨酸酶大部分是以包涵体的形式存在，包涵体中的精氨酸酶是没有活性的。 本课题主要研究了如何用离心，超声波破碎来提取转基因工程菌中的包涵体，如何用透析复性的方法使包涵体中的精氨酸酶恢复活性并且用阴离子交换层析的方法来纯化精氨酸酶。59983
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毕业论文关键词 ： 精氨酸酶 转基因工程菌 提取 纯化
Title Title Title Title The extraction of arginase form genetically engineered Bacteria
Abstract Arginase,which converts arginine to ornithine and urea,is an importantkind of enzyme in urea cycle.It plays a significant role in Nmechabolism. simultaneously ,arginase can serve as an anticarinogenic agentby converts arginine. Arginase is exist in genetically engineered bacteriain the form of inclusion body, which has no enzyme activity .My topics isstudy how Extract the inclusions from the transgenic engineering bacteriaby Centrifug e and ultrasonic broken ,how make arginase from the inclusionsreactivation by dialysis and purifies arginase by anion exchangechromatography .
Key words ： arginase transgenic bacteria extraction purification
目次目次目次目次
1绪论1
1.1人I型精氨酸酶的性质.1
1.2精氨酸酶的重要性...1
1.3精氨酸酶的生产以及工程菌...2
1.4包涵体的提取...3
1.5蛋白质的提取和纯化.4
1.6课题研究的主要内容...6
2试验内容和方法..6
2.1实验材料,仪器与试剂.6
2.1.1酶来源..7
2.2实验方法及步骤...10
3实验结果和分析..13
3.1上清液测酶活结果分析...13
3.2透析后的酶活结果分析...14
3.3阴离子交换层析结果分析...16
结论17
致谢18
参考文献19
1 1 1 1 绪论绪论绪论绪论精氨酸酶是一种可以将精氨酸水解成鸟氨酸和尿素的酶 ， 它通过将精氨酸上的胍基除掉来完成上述的步骤 。 精氨酸酶的来源十分广泛 ， 在各种生物体内都可以找到它 。 由于绝大部分的生物都是靠尿素循环中其他的酶来合成精氨酸 ， 而只有含精氨酸酶的生物才能完成完整的尿素循环 ， 所以尿素循环形成完整的循环的标志就是精氨酸酶 ， 至今为止人类已经对许多生物体内的精氨酸酶酶基因进行了测序并且克隆 ， 所以我们才能够将精氨酸酶酶基因导入到工程菌种并且进行大规模培养生产。1.1 1.1 1.1 1.1 人 人 人 人 I I I I 型精氨酸酶的性质 型精氨酸酶的性质 型精氨酸酶的性质 型精氨酸酶的性质尿素循环对于生物体来讲是十分重要的 ， 例如人体每天要排除 500mmol 左右的氮 ， 这一步骤就是通过尿素循环来完成的 ， 在尿素循环过程中 ， 精氨酸酶有着尤为重要的地位。精氨酸酶在分解精氨酸的过程中受着精氨酸以及锰离子的调节 ，底物精氨酸以及正二价锰离子对于精氨酸酶的活性有着极大的影响 ， 这表明了精氨酸酶在尿素循环中起着调节的作用 。 人 I 型精氨酸酶 的酶基因总的长度为 12kb ，其中包含着八个外显子 （ 外显子是 是真核生物 基因 的一部分 ， 它在剪接后仍会被保存下来 ， 并可在 蛋白质生物合成 过程中被表达为蛋白质 ） 。 而 人 I 型精氨酸酶 的分子量为 34.7KD ，实验室测活使用的最适 PH 为 9.5 ，温度为 37 度。
1.2 精氨酸酶的重要性 精氨酸酶的重要性 精氨酸酶的重要性 精氨酸酶的重要性精氨酸酶在尿素循环中的重要地位就决定了它对于生物体的重要性 。 对于生物体来讲 ， 氨是一种有毒物质 ， 氨能对高等动物的脑造成极大的伤害 ， 例如高血氨症 ， 当 肝功能严重损坏时尿素合成 就会有从而 障碍导致血氨浓度升高 ， 严重的高血氨症者有明显的脑萎缩，皮质变薄而透明，侧脑室和第 3 脑室扩大。在肿瘤治疗领域中 ， 精氨酸酶也有着其独特的应用 。 氨基酸是细胞生长的必需条件 ， 有研究表明 ， 相对于普通的细胞 ， 恶性肿瘤的细胞对于氨基酸的缺乏更为敏感，当生存环境中氨基酸的大量缺乏的时候会导致恶性肿瘤细胞迅速的死亡 ， 因而在肿瘤治疗领域中诞生了一种全新是方法 ， 那就是氨基酸剥夺 。 虽然氨基酸剥夺同样会对人体内的正常细胞产生影响甚至会导致人体代谢不平衡 ， 但是相对化疗理疗而言 ， 副作用较小 。 至今为止已经有某些氨基酸剥夺取得了临床验证 ， 同理源]自{751^*论\文}网·www.751com.cn/ ， 精氨酸酶应该也可以用于氨基酸剥夺治疗方法 。 将精氨酸应用于氨基酸剥夺有着独特的优势 ， 对于人体 ， 精氨酸是一种半必需氨基酸 ， 只有在快速增长的组织器官中是必需的 ， 而恶性肿瘤细胞正是处于快速增长的阶段 ， 以为它是无线增殖的。