菜单
  

    1.2.7 大豆叶片生理指标的测定
    随机剪取处理组和对照组大豆植株叶片进行植物叶片中叶绿素含量、可溶性糖含量、可溶性蛋白质含量、PPO活力和POD活力的测定。
    植物叶片叶绿素含量的测定:
    1. 称取剪碎的大豆叶片新鲜样品0.3g,放入研钵中,2mL80%丙醇,迅速研磨,将匀浆将倒入2mL EP管(eppendorf管)中,5000r/min,10min离心,抽提几次。
    2. 用无水乙醇定容上清液至25mL。
    3. 把叶绿素提取液摇匀后倒入比色杯中(厚度约为1cm),以80%丙醇作对照,分别在波长645nm、652nm和663nm下测定光密度值,最后计算。
    植物叶片中可溶性蛋白质含量的测定:
    1.    标准曲线的绘制
    0-100µg标准曲线的制作,取依次编号1-6的试管751只,,分别加入1000µg/mL标准牛血清蛋白0mL、0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL和0.5mL;蒸馏水5mL、4.9mL、4.8mL、4.7mL、4.6mL和4.5mL;试管1-6中蛋白质含量分别为0µg、20µg、40µg、60µg、80µg和100µg。准确吸取所配的各管溶液0.1mL,分别放入10mLEP管中,并加入5mL考的马斯亮蓝G-250试剂,充分混匀,放置2min后,测定在595nm处的吸光度值,绘制标准曲线。
    2.    酶液的提取
    称取重约0.5g的大豆叶片,加入5mL预冷的0.1mol/L pH7.0磷酸缓冲液,在冰浴下快速研磨成匀浆(注研钵需要提前预冷),5000r/min离心10min(2~4℃),上清液为样品的提取液。吸取0.1mL样品的提取液,按上述方法操作,测得溶液在595nm处的吸光度值,根据标准曲线查出相应的蛋白质浓度。
    3.    结果计算
    植物叶片中可溶性糖含量的测定:
    1. 绘制标准曲线
    (1)配置浓度分别为0、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100mg/L。
    (2)分别吸取上述糖溶液1mL,分别放入EP管中,并加入蒽酮试剂5mL,充分混匀,将装有溶液的EP管煮沸10min,取出冷却。
    (3)测反应液在波长为620nm处的吸光值。
    (4)用测量结果绘制标准曲线。
    可溶性糖含量的测定
    1. 可溶性糖的提取:
    (1)称取重约0.5g的大豆叶片,剪碎,加入少许乙醇,研磨,研磨液用移液器转移到EP管中,用约70℃的热水洗涤研钵,洗液并入EP管中,再加蒸馏水3~4mL。EP管水浴约30min 70~80℃。
    (2)待溶液冷却后,进行除去混合液中的蛋白质的操作,加入醋酸铅至不再形成白色沉淀为止。
    (3)离心5000r/min 10min,取上清液,在上清液中加入少量草酸钠粉末,使生成草酸铅沉淀,离心5000r/min 10min,留上清液。
    2. 可溶性糖含量的测定
        吸取可溶性糖的提取液1mL,放入EP管里,并加入蒽酮试剂5mL混合,放于沸水浴中煮沸10min,取出冷却。然后在分光光度计波长620nm处测定吸光值,,再从标准曲线上查得提取液中糖的浓度。
    多酚氧化酶活力测定:
    1. 酶液的提取
    称取0.3g大豆叶片,剪碎,加入3mL的0.1mol/L、pH6.5磷酸缓冲液,磨成匀浆,进行几次离心抽提,总上清液加入30%饱和度硫酸铵,离心取上清液,后加硫酸铵使达60%饱和度,离心收集沉淀。沉淀用2~3ml 0.01mol/L、pH6.5磷酸缓冲液溶解。
    2. 活性酶的测定
    在EP管中加入3.9mL的0.05mol/L pH5.5磷酸缓冲液、1.0mL 0.1mol/L儿茶酚,水浴37℃ 10min,取出后加入0.5mL酶液,迅速摇匀,于525nm波长测在1~2min内吸光度变化(A)值。
  1. 上一篇:渍涝胁迫下抗坏血酸对玉米幼苗生长的影响
  2. 下一篇:水杨酸对酸浆种子萌发及幼苗生长的影响
  1. 十大功劳叶抗炎活性的筛选的研究

  2. 常温土壤环境中嗜热香草...

  3. NO.555定量分析方法的建立

  4. 碱胁迫对花生叶片膜脂过氧化的研究

  5. Tas1r1鲜味基因在脊椎类动物中的进化规律分析

  6. 高光谱成像技术在豆奶粉...

  7. 番茄逆境响应基因SlERF26的...

  8. 乳业同业并购式全产业链...

  9. 酸性水汽提装置总汽提塔设计+CAD图纸

  10. 大众媒体对公共政策制定的影响

  11. 河岸冲刷和泥沙淤积的监测国内外研究现状

  12. 电站锅炉暖风器设计任务书

  13. 十二层带中心支撑钢结构...

  14. 当代大学生慈善意识研究+文献综述

  15. 杂拟谷盗体内共生菌沃尔...

  16. 中考体育项目与体育教学合理结合的研究

  17. java+mysql车辆管理系统的设计+源代码

  

About

751论文网手机版...

主页:http://www.751com.cn

关闭返回