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摘 要：本实验是在安琪甜酒曲中提取酵母，配制YPD培养基采用梯度稀释接入培养基进行活化，条件为30℃，24 h。接着配制YPD培养基采用梯度稀释进行初选，条件30℃培养24 h。采用点样法进行复选，条件30℃培养24 h。最后采用划线培养进行酵母显微镜检测。将酵母接种到液体YPD培养基进行扩大培养，条件28℃、150 r/min、培养24 h。采用测5组数据求平均值法测生长曲线，每隔2 h用分光光度计在600 nm下测一次紫外吸光值（OD值），测13组数据，作图分析。最后破碎酵母以便提取所需蛋白，利用柱层析进行初步分离，再利用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测和分析。关键词：酵母；梯度稀释；生长曲线8702
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Primary Extraction and Purification and Sequence Analysis of Yeast Pim1 Protease
Abstract：This experiment isolated yeast strains from Anqi wine Jiuqu. They were incubated with gradient dilution using YPD medium at 30℃for 24 hours. After that, the yeast was originally screened with the medium of YPD and screened twice with spotting sample. After checked and picked under microscope, the yeast strains were transferred into YPD medium and incubated at 30 ℃ for 24 hours at the rotating speed of 150 r/min, and the growth curve of yeast was determined. Finally, the yeast strain organisms were centrifuged for cell crush and the extraction of proteins. The Pim1 proteases were primarily purified with protein separation column chromatography, and detected by polyacrylamide gel electrophoresis.
Key words：Yeast; Gradient dilution; Growth curve
目 录
摘要 1
引言 2
1. 材料和方法 2
1.1 实验材料 2
1.1.1 菌株 2
1.1.2 培养基和缓冲液 2
1.1.3 主要试剂 6
1.1.4 主要仪器 6
1.2 试验方法 6
1.2.1 酵母活化 6
1.2.2 酵母菌的初筛 7
1.2.3 酵母菌的鉴定 7
1.2.4 酵母菌生长曲线的测定（此处引自09级毕业论文） 7
1.2.5 酵母细胞破壁条件确定 8
1.2.6 酵母细胞破壁程度检测 9
1.2.7 Pim1蛋白的初步分离 9
1.2.8 凝胶电泳检测 10
1.2.9酵母Pim1蛋白对HSP60的降解 10
2. 结果与分析 11
2.1活化结果 11
2.2 初筛结果 11
2.3 酵母菌的鉴定 12
2.4 酵母菌的生长曲线(此处引自09级毕业论文) 12
2.5 细胞破壁条件检测 13
2.6 层析结果 14
2.7 层析后凝胶电泳 14
3. 结论与展望 16
参考文献 17
致谢 18
酵母Pim1蛋白酶对HSP60蛋白的降解 引言目前，Pim1是一种丝氨酸／苏氨酸蛋白酶，已有研究显示Pim1在细胞凋亡、增殖、分化和肿瘤发生过程中起重要作用，并证实其在前列腺癌中有高表达。提取Pim1蛋白并对研究Pim1蛋白有很重要的积极作用的作用，以便能更好的预防和治疗疾病[1]。
热激蛋白 Heat Shock Proteins (HSPs)HSP可提高细胞的应激能力，特别是耐热能力。预先给生物以非致死性的热剌激，可以加强生物对第二次热剌激的抵抗力，提高生物对致死性热剌激的存活率，这种现象称为热耐受。目前，在此前研究的基础上进一步验证以上理论知识，HSP60蛋白在现在的医疗中有很大功效，对突发性白血病等疾病作用明显，通过此次验证研究可以在理论上丰富此方面的研究资料，在实践中也具有一定的潜在意义[2]。本文通过对酵母菌的培养，酵母Pim1蛋白和HSP60蛋白的提取.初步探讨酵母Pim1蛋白酶对HSP60的降解。