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T%=(a+b)/m×100; C%=b/(a+b)×100
式中 a—Acr的质量(g);
b—Bis的质量(g);
m—凝胶溶液总体积(ml)。
在此,a∶b(W/W)是关键;a∶b <10时,形成的凝胶脆、硬、呈乳白色;a∶b>100时,即使5%的凝胶也呈糊状,易断裂。要制备透明而有弹性的凝胶,a∶b要控制在30左右。通常T = 2%~5%时,a∶b =20左右;T = 5%~10%时,a∶b =40左右;T = 15%~20%时,a∶b =125~200左右。T在3%~25%的范围内,凝胶易发生聚合。T=7.5%的胶称作标准凝胶。大多数生物体内的蛋白质在此凝胶中电泳能得到满意的结果。
2.5 体外传录
在DNA指导下RNA的合成称为转录,RNA链的转录起始于DNA模板的一个特定起点,并在另一个终点处终止。DNA双链在解旋酶的作用下将两条链局部分开,RNA聚合酶以其中一条链为有效的模板,在其上合成出互补的RNA链,DNA经转录后仍以全保留的方式(conservative mode)保持双螺旋结构,已合成的RNA链则离开DNA链[33]。
由研究知T7 RNA聚合酶能够特异性识别T7启动子,从而特异性地转录T7启动子后的DNA序列。因此本实验通过在DNA链上加上T7 启动子后通过T7 RNA聚合酶来实现所需RNA链的合成。由现代分子生物学知识可知,RNA转录的基本过程包括:模板识别、转录起始、通过启动子及转录的延伸和终止。具体过程为RNA聚合酶与启动子DNA双链相互作用并与之相结合,在RNA聚合酶的催化作用下,以4种三磷酸核苷(NTPs)为原料,根据碱基配对原则(A-U,T-A,G-C)
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