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摘要:该试验在单因素对重组巴斯德毕赤酵母产纤维素酶的液体培养基优化的基础上，通过CMC测酶活的方法，具体从初始PH值优化，BMGH培养基碳源优化，BMGH培养基氮源优化，诱导物浓度优化四个方面着手分析确定产纤维素酶的最佳培养基成分及条件。结果表明，在以甘油作为碳源，硫酸铵作为氮源，并且在PH为7.0，甘油浓度为2.0%，硫酸铵浓度为8.5 g/L，诱导物浓度为1.5%时，发酵产生的纤维素酶酶活最大，为5103± 33.7 U/ml。通过优化实验，重组巴斯德毕赤酵母达到了较高的产纤维素酶活力，为纤维素酶进一步用于工业化生产奠定了基础。65505
毕业论文关键词：重组巴斯德毕赤酵母，纤维素酶，CMC，培养条件优化
Abstract: The test in the single factor of the recombinant Pichia pastoris producing cellulase liquid culture medium optimization based on, through the CMC measuring enzyme activity, specifically from the initial pH value optimization, BMGH culture medium carbon source optimization, BMGH culture medium nitrogen source optimization, inducer concentration optimization four aspects proceed analysis to determine the cellulase production by optimum culture medium compositions and conditions. The results show that with glycerol as carbon source, ammonium sulfate as the nitrogen source and pH 7.0, glycerol concentration is 2.0%, ammonium sulfate concentration was 8.5 g/L, inducer concentration 1.5%, produced by the fermentation of cellulase enzyme live, is 5103±33.7 U / ml. By optimizing the experiment, recombinant Pichia pastoris reached higher activity of cellulase, cellulase used for further industrialization laid the foundation.
Keywords：Pasteur recombinant Pichia pastoris，Cellulase，CMC，optimization of culture conditions
目 录
1前言 6
1.1纤维素酶的简介 6
1.2 毕赤酵母表达系统 6
2材料与方法 7
2.1材料 7
2.1.1重组巴斯德毕赤酵母 7
2.1.2主要仪器及设备 7
2.1.3酶和主要试剂 8
2.2试验方法 8
2.2.1主要试剂以及培养基的配制 8
2.2.2初始PH值优化 8
2.2.3 BMGH培养基碳源优化 8
2.2.4 BMGH培养基氮源优化 8
2.2.5诱导物浓度优化 9
3结果与讨论 9
3.1初始PH值优化 9
3.2 BMGH培养基碳源优化 9
3.3 BMGH培养基氮源优化 10
3.4诱导物浓度优化 11
3.5最佳产酶条件优化结果 11
结 论 13
参考文献 14
致 谢 16
1前言
1.1纤维素酶的简介
纤维素酶是一组复合酶的统称，主要包括内切葡聚糖酶，外切葡聚糖酶和β—葡萄糖苷酶，上述三种酶通过协同作用将纤维素转化成葡萄糖[1]。木质纤维素中纤维素主要以结晶状态存在，而外切葡聚糖酶是唯一对结晶纤维素起作用的纤维素酶，在木质纤维素降解成还原糖的过程中，外切葡聚糖酶起着非常关键的作用[2]。因此外切葡聚糖酶基因的克隆表达，对于研究纤维素酶的降解机制有着十分重要的意义。