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2.1.2主要仪器及设备
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2.1.3酶和主要试剂文献综述
柠檬酸缓冲液：柠檬酸 210g/L，调节pH至3.8，然后按1：19比例稀释至pH值为4.8。
2%CMC溶液：称取2g CMC-Na,加入约80ml柠檬酸缓冲溶液，50℃边水浴边搅拌溶解，溶解后定容至100ml,置于冰箱。
2.2试验方法
2.2.1主要试剂以及培养基的配制
BMGH：1 % 甘油、7.5 g/L YNB、4×10-5 % 生物素、0.1M磷酸钾缓冲液(PH8.0)，121℃灭菌20 min，其中YNB和生物素需要过滤除菌。
BMMH：0.5 %甲醇、7.5 g/LYNB、4×10-5 %生物素、0.1 M磷酸钾缓冲液(PH8.0)，121℃灭菌20 min，其中YNB和生物素需要过滤除菌。
2.2.2初始PH值优化
BMGH培养基和BMMH培养基的初始pH值默认为8.0，而纤维素酶的最适pH值一般在4.0 到6.0之间，在pH为 8.0时酶活力可能受到影响。有报道指出毕赤酵母表达系统在不同的初始pH值下表达不同的外源蛋白差异显著 [123]。因此我们调整BMGH和BMMH培养基的初始pH值分别为3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0，分别测定上清的纤维素酶酶活，以确定最适初始pH值。
2.2.3 BMGH培养基碳源优化
我们观察到BMGH培养基中的甘油浓度对重组巴斯德毕赤酵母向培养液中分泌的重组酶活力和蛋白产量影响很大，因此我们在BMGH培养基中尝试使用不同的甘油浓度，0.5%、1.0%、1.5%、2.0%和2.5%，分别测定上清的纤维素酶活和细胞干重，以确定最适的甘油浓度以及对重组细胞生长的影响。来.自/751·论|文-网·www.751com.cn/