基于叶绿体psbA-trnH基因间隔序列的酸浆属植物的分子鉴别(5)

菜单

Outgroup Nicandra physaloides NHZ0001 Xiasha, Hangzhou, Zhejiang

Nicandra physaloides NHZ0002 Yiwu, Jinhua, Zhejiang

Nicandra physaloides NHZ0003 Jiujiang, Jiangxi

1.2研究方法

1.2.1 DNA提取与电泳检测

实验材料为新鲜酸浆属植物组织，采用生工生物工程（上海）股份有限公司的Ezup柱式基因组DNA抽提试剂盒（植物）提取基因组DNA，将得到的DNA溶液置于-20℃保存。具体步骤如下：将50-100mg的新鲜组织在液氮中研磨成粉末，转移至1.5ml离心管中；加入600ul65℃预热的Buffer PCB和12ulβ-巯基乙醇，混合均匀后置于65℃的水浴中25min；冷却至室温后加入600ul的氯仿，12000rpm离心5min，取上层水相200ul至干净的离心管中；加入200ulBuffer BD，混匀后加入200ul无水乙醇，将其全部加入到吸附柱中，静置2min，10000rpm离心1min，倒掉废液；将吸附柱放回收集管中，加入500ulPW Soultion，10000rpm离心1min，倒掉废液；将吸附柱放回收集管中，加入500ulWash Solution，10000rpm离心1min，倒掉废液；将吸附柱放回收集管中，12000rpm离心2min；取出吸附柱，放入一个新的1.5ml离心管中，在吸附膜中央加入50ulTE Buffer，静置3min，12000rpm离心2min，得到的DNA溶液置于-20℃保存。

琼脂糖凝胶电泳法检测DNA纯度和完整性：取5ul DNA样品与2ul 6×Loading Buffer混合，在1×TAE缓冲系统下，于含溴化乙锭（EB）（0.5ug/ml）的1%琼脂糖凝胶进行凝胶电泳，紫外凝胶成像系统（Bio-RAD，Universal HOODⅡ）拍照，观察点样孔亮度、条带亮度及清晰度、有无严重拖尾等现象来确定样品DNA的纯度和完整性。