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    标准曲线的制作方法:

    取7支10mL具塞刻度试管编号,按表3分别加入浓度为l mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸配成不同葡萄糖含量的反应液。

    表3 还原糖标准曲线的制作

    管号 1mg/mL葡萄糖标准液(mL) 蒸馏水(mL) DNS(mL) 葡萄糖含量(mg)

    0 0 2 1.5 0

    1 0.2 1.8 1.5 0.2

    2 0.4 1.6 1.5 0.4

    3 0.6 1.4 1.5 0.6

    4 0.8 1.2 1.5 0.8

    5 1.0 1.0 1.5 1.0

    6 1.2 0.8 1.5 1.2

    将各管摇匀,在沸水浴中准确加热5min,取出后冷却至室温,用蒸馏水定容至10mL,加塞后颠倒混匀。在分光光度计上进行比色,调波长540nm,用0号管调零,测出l~6号管的吸光度值。以吸光值为纵坐标,葡萄糖含量(mg)为横坐标,绘制标准曲线。

    计算结果均在标准曲线中查出相应的还原糖含量,计算样品中还原糖的百分含量:还原糖含量(%)=还原糖毫克数×(提取液体积/显色时所用体积) ×100%/ (样品质量×1000) 。

    1.3.3 蛋白质含量的测定

    采用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量[10]。吸取样品提取液1.0mL,放入试管在中,加入5mL考马斯亮蓝G-250溶液,充分混合,放置5min后在595nm下比色,记录吸光值,通过标准曲线查得蛋白质含量。来!自~751论-文|网www.751com.cn

    标准曲线(蛋白质含量为0~100μg/mL)的制作:

    牛血清蛋白溶液:浓度为100μg/mL,按照表4配置:

    表4蛋白质标准曲线的制作

    管号 1 2 3 4 5 6

    蛋白质标准液(mL) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0

    蒸馏水(mL) 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0

    蛋白质含量(μg) 0 20 40 60 80 100

    考马斯亮蓝液(mL) 5 5 5

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