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    摘要：本研究以CZ130302菌株ChzM-TolA基因作为研究对象，成功构建了ChzM-TolA的缺失突变株△CZ130302-ChzM-TolA。对缺失突变株的生长特性、溶血性、及其对Hep-2 cells和bEnd3.cells黏附特性进行了分析，结果显示，缺失突变株△CZ130302-ChzM-TolA与CZ130302菌株的菌落形态基本一致，溶血性与生长特性均无明显差异；缺失突变株△CZ130302-ChzM-TolA较野生株对Hep-2 细胞黏附相关性下降36.69%，对bEnd3 细胞黏附相关性下降31.27%；BALB/c小鼠攻毒试验表明缺失突变株△CZ130302-ChzM-TolA毒力明显下降、小鼠存活率上升50%。试验结果验证了该基因与毒力相关，为新型猪链球菌株CZ130302致病机制的研究奠定了基础。27472
    毕业论文关键词：缺失突变株；生物学特性；鉴定；致病性
    Construction and Characterization of ChzM-TolA Gene Knock-out Mutant in Streptococcus Suis CZ130302 Strain
    Abstract：From March to May 2013, pandemic meningitis was spread in Jiangsu province. The strain CZ130302 was identified as the S. Suis.  the current research on the strain CZ130302 is less. To research the function of ChzM-TolA gene in CZ130302, the isogenic ChzM-TolA mutant was constructed. To research the function of ChzM-TolA gene, the biological characteristics and pathogenicity of △CZ130302-ChzM-TolA and wild type CZ130302 were compared. The result showed that their colony morphology, hemolytic and growth characteristics were no obvious difference, the Hep 2 cells adhesion of △CZ130302-ChzM-TolA dropped 36.69%, the bEnd3. Cells adhesion of △CZ130302-ChzM-TolA dropped 31.27% ,the toxicity of △CZ130302-ChzM-TolA declined obviously, the survival rate of BALB/c up to 50%. ChzM-TolA gene played an important role in pathogenicity of CZ130302.
    Key words: gene knock-out mutant; biological characteristics; identification; pathogenicity
    目  录
    摘要1
    关键词1
    Abstract1
    Key words1
    引言1
    1 材料2
    1.1菌株及培养条件2
    1.2 细胞株及培养条件2
    1.3 实验动物及饲养方法2
    1.4 试剂与培养基2
    1.5 仪器与耗材3
    2 方法3
    2.1 △CZ130302-ChzM-TolA缺失突变株的构建 4
    2.1.1 CZ130302全基因组的提取4
    2.1.2 pSET4s质粒的提取5
    2.1.3 融合PCR缺失目的基因6
    2.1.4 自然转化8
    2.1.5 △CZ130302-ChzM-TolA缺失突变株的筛选鉴定8
    2.2 △CZ130302-ChzM-TolA缺失突变株溶血性分析8
    2.3 △CZ130302-ChzM-TolA缺失突变株生长特性研究8
    2.4 细胞黏附试验8
    2.5 BALB/c小鼠攻毒试验9
    3 结果与分析9
    3.1 △CZ130302-ChzM-TolA缺失突变株PCR鉴定结果9
    3.2 △CZ130302-ChzM-TolA缺失突变株溶血性分析9
    3.3 △CZ130302-ChzM-TolA缺失突变株生长特性研究10
    3.4 细胞黏附试验结果10
    3.5 BALB/c小鼠攻毒试验结果11
    4 讨论11
    致谢12
    参考文献12
    图1 pSET4s质粒图谱4
    图2 构建缺失突变株原理图4
    图3 △CZ130302-ChzM-TolA缺失突变株PCR鉴定9
    图4 CZ130302与△CZ130302-ChzM-TolA缺失突变株的菌落形态和溶血活性10
    图5 CZ130302与△CZ130302-ChzM-TolA缺失突变株生长曲线10
    图6细胞黏附试验10
    图7 攻毒试验结果11
    表1 PCR扩增及检测引物4
    表2 试验所用细胞系9
    CZ130302新型猪链球菌株ChzM-TolA基因缺失株的构建
        猪链球菌(Streptococcus suis, SS)属于革兰氏阳性、兼性厌氧型、具有溶血性、单个或散在的球菌，液体培养基培养时呈短链状，是重要的人畜共患病病原之一。SS是引起世界范围内猪链球菌病的最主要的病原，它不但可以引起猪的败血症，侵害其中枢神经系统和其他组织器官，引发脑膜炎、肺炎、心内膜炎和关节炎[1-3]等炎性反应，给我国养猪业造成严重的经济损失，还可引发人的化脓性关节炎和中毒性休克综合症[4-5]，对公共卫生和食品安全构成重大威胁，是一种引起公共卫生安全问题的重要病原。
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