-
目的： 检测SHSY5Y细胞在GDNF的诱导下分化为多巴胺能神经细胞的情况。
- 上一篇：双咪唑双钯化合物中链的长短对其催化活性的影响
- 下一篇：紫甘薯花青素减轻高脂诱导的肝脏炎症反应
方法：采用Western Blot法，检测出TH表达的变化。结果：TH表达增加。结论：SHSY5Y细胞在GDNF的诱导下成功分化为多巴胺能神经细胞。40155
毕业论文关键词： SHSY5Y、DA、PD、TH
The expression of TH after SHSY5Y cells differentiation
Abstract
Aim: Detect SHSY5Y cells under the induction of GDNF differentiated into dopaminergic neurons. Method: Using Western Blot method to detect the changes of TH expression. Results: the expression of TH increase. Conclusion: SHSY5Y cells under the induction of GDNF successfully differentiated into dopaminergic neurons.
Keywords: SHSY5Y、DA、PD、TH
前言
药物治疗和外科治疗都是治疗帕金森病常用的方法，近来干细胞移植以及基因治疗等方法备受关注。但是这其中不光涉及的伦理道德问题，此外，由于移植的细胞大多为终末分化细胞，存活时间短、数量少等问题均使细胞移植的应用受到了限制【1】。然而，通过诱导分化干细胞为多巴胺能神经元却可以为细胞移植法治疗帕金森病给出理论依据[2]。
针对帕金森氏病,目前依旧不存在根治的治疗方法[3]。通常采用多巴胺的前体,左旋多巴(L-dopa)或其结构类似物作为治疗药物。但是,这种治疗并不是针对病因,不仅脑内残留的多巴胺能神经元继续合成多巴胺的情况会受产生影响，其释放多巴胺的情况也会影响治疗效果[4]。伴随着病情的加重,脑内剩余的多巴胺能神经元的数量会下降,此药的疗效也会降低,同时会出现明显的副作用。这样的治疗方法也就变得黯然失色了 [5]。
对药物代偿治疗失效的患者来说,可以选择神经营养因子治疗法。研究发现, GDNF可以增加多巴胺神经元的存活时间，与此同时还能加强其功能[6]。
在治疗帕金森病的过程中，一般有两种胚胎干细胞移植的方法：①提前将胚胎干细胞在体外分化为多巴胺能神经元然后再移植②直接移植干细胞或前体细胞[7]。
人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y），它具有又圆又小的细胞体，大多聚集为拟核团[8]，它是PD的实验研究中常用的细胞模型 [9]。作为DA能神经细胞在体存活所必需的物质，GDNF可以提高其存活率。进一步研究GDNF的保护机制，对于防治PD意义重大[10]。
研究发现，GDNF发挥作用是依赖于它的受体的［11］，因此本实验在细胞培养液中添加了 GDNF 以促进SYHSY5Y细胞的分化及文持多巴胺神经元的健康生长。
实验部分
实验材料
实验试剂:SDS-PAGE凝胶、10％过硫酸铵、SDS-PAGE电泳液、转膜液、DAB混合液、洗涤液、封闭液、一抗和二抗稀释液、β-actin、山羊抗兔lgG751根酶（二抗）、一抗（TH）、蛋白Marker、蛋白。
实验仪器：SDS-PAGE电泳设备；转膜仪；脱色摇床；显影的暗室；移液枪。
实验步骤
（一）准备工作
将移液枪枪头进行高压灭菌；玻璃板洗净放入烘箱烘干；配制电泳液：Tris粉末15.1g、Glycine（甘氨酸）94g、SDS5.0g，用蒸馏水定容至1L；配制转膜液：Tris粉末3.03g、Glycine14.42g、甲醇150ml，用蒸馏水定容至1L后放进冰箱冷藏；无菌洁净室用75％酒精浸泡过的棉球擦拭。