前期实验已发现,淫羊藿总黄酮提取物对鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane, CAM)血管生成具有抑制作用[14],而目前关于ICA抗血管生成的研究未见报道。本课题组旨在前期结果的基础上,通过MTT法、流式细胞术和Transwell法体外实验观察ICA抗血管生成的能力,研究其对血管生成的影响,为进一步开发ICA的药用价值提供理论依据,也为研究中药抗肿瘤的现代化研究奠定基础。
2材料与方法
2.1材料
2.1.1细胞株
人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cell, HUVEC)购自美国Sciencell公司。
2.1.2实验药品
空白对照组:无水乙醇;
实验组:淫羊藿苷(ICA),由中国标准品鉴定所提供。
2.1.3实验试剂
胎牛血清,购自杭州四季青生物工程材料有限公司产品;
高糖DMEM培养液、0.25%胰酶,购自Gibco公司;
Transwell培养小室,购自美国Corning 公司产品;
二甲基亚砜( DMSO)、碘化丙锭(propidium iodide, PI)、吖啶橙(AO)、伊红、苏木精、纤粘连蛋白(FN) 、Eukitt胶,购自美国Sigma公司;
MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒,购自凯基生物材料有限公司;
丙酮(分析纯),生产厂家:中国杭州化学试剂有限公司;
甲醛(分析纯),生产厂家:中国浙江衢州巨化试剂有限公司;
无水乙醇(分析纯),生产厂家:安徽安特生物化学有限公司;
75%酒精(自配)。
2.1.4实验仪器
超级洁净工作台,购自博讯实业有限公司医疗设备厂;
T1-SM120型倒置显微镜,购自Nikon公司;
高压灭菌器,购自美国Zealway公司;
EPICS XL流式细胞仪,购自美国Coulter 公司;
荧光显微镜,购自德国Leica公司;
酶联免疫检测仪,购自Biorad公司;