- 上一篇：木犀草苷对肝癌细胞增殖的影响
- 下一篇：G3放线菌代谢产物抑制肿瘤细胞活性的初步研究
黄酮类化合物广泛存在于多种植物中，它们一般具有2个苯环，中央由3个碳链相互连接而形成C6-C3-C6基本构型。黄酮类化合物中主要包含黄酮、二氢黄酮、黄酮醇、二氢黄酮醇、异黄酮类等化合物[7]。黄酮类化合物是植物的特有物质，且因其具有独特的化学结构，因此对动物细胞有着很多重要的生理作用，近年来也有着很多对黄酮类化合物的药理作用的研究，研究表明其具有很好的清除自由基抗氧化的作用，具有增加机体免疫功能的作用，并且对心血管病、肿瘤、癌症等疾病也有一定的作用[8-9]。
黄酮类化合物的提取方式主要有溶剂法、微波法、酶解法、超临界流体萃取法、双水相萃取法、超声波提取法[10]。超声波提取法能够加快植物中的有效成分的提取，是因为其利用了超声波的空化作用以增进植物中的有效成分的浸出，该方法具有设备简单、操作便利、快捷、提取率高的优点[11]，但关于用超声提取悬铃木叶中总黄酮的工艺研究尚未见报道。
黄酮类化合物的含量的检测方法主要有分光光度法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、超临界流体色谱法、薄层扫描法等[11]。紫外分光光度法具有设备简单、重复性好、易掌握等优点，因此在测定植物中黄酮类化合物的含量的应用中最为广泛[12]。
但是，对于悬铃木叶中总黄酮提取的工艺研究尚未见报道，对其体外抗氧化作用也未见报道。因此，本实验采用单因素试验研究各因素分别对其提取工艺的影响作用，并应用响应曲面优化悬铃木叶总黄酮的超声提取工艺条件，研究确定提取悬铃木叶中总黄酮的最佳提取工艺条件，并对悬铃木叶中总黄酮的提取液进行体外抗氧化活性的测定，为进一步研究悬铃木叶中总黄酮的生理生化功能及进一步开发利用提供理论依据。
2材料与方法
2.1材料与试剂
悬铃木叶于2014年9月采摘自江苏师范大学校门口，经晾晒干后将其粉碎成粉末，密封保存备用。
无水乙醇、芦丁标准品、FeSO4、H2O2、水杨酸、邻苯三酚、Tris、HCl。
2.2仪器与设备
UV2800紫外可见分光光度计上海舜宇恒平科学仪器有限公司；KQ-250DE型医用数控超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司；DK-SI4电热恒温水浴锅上海精宏实验设备有限公司；干燥箱、MP2002电子天平上海恒平科学仪器有限公司；电子天平赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；TDL-40B台式离心机上海安亭科学仪器厂；粉碎机；循环水式多用真空泵SHB-IIIA 上海豫康教仪器设备有限公司；旋转蒸发器上海申生科技有限公司；日立高效液相色谱seriesd – 7000；二极管阵列检测器；四极质谱仪 美国安捷伦科技；色谱柱Capcell pak C18UG120 250×4.6 mm i.d,S-5 5µm，资生堂有限公司；保护柱10×4.0 mm i.d。
2.3实验方法
2.3.1 确定最大吸收波长
分别取芦丁标准品0.1mg溶于2.9mg的30%乙醇中及悬铃木叶中总黄酮提取液在200-400nm进行紫外扫描。
2.3.2制备芦丁标准曲线文献综述
参考文献[13]的方法，称取5mg的芦丁标准品，溶解于30%的乙醇中，定容于50mL的容量瓶中制得0.1mg·mL-1的芦丁溶液，分别取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL上述制备的溶液到5个10mL的容量瓶中，用30%的乙醇定容。以30%的乙醇为空白对照，在最大波长处分别测其不同浓度的吸光度，以其吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制芦丁标准曲线。
2.3.3 HPLC-MS法测定悬铃木叶总黄酮提取液的主要成分结构
参考文献[14]，用HPLC对悬铃木叶总黄酮提取液进行分析，得出提取液中主要物种种类。流动相由溶液A（0.1 %甲酸溶于水）和溶液B（0.1 %的甲酸溶于氰化甲烷）组成。在柱温为25℃时，以1.0毫升/分钟进行梯度洗脱，在40分钟内由10 %线性增加到26 %B，在70分钟达到65 %，在100分钟达到100 %B并保持到105分钟。最后一步，在70分钟时65 %B增加到在100分钟时100 %B。