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氢氧化钠 20121029 国药集团化学试剂有限公司
2.2 检测波长的确定
2.2.1实验方法
选择适宜的样品浓度，将样品溶液在200nm-400nm的波长范围内，扫描速度：中等，采样间距：0.2nm进行波长扫描，测定样品在不同波长下的吸光度值，使吸光度的值在0.2-0.8之间。同时考虑辅料对其吸光度的影响，来选择最适宜的波长。空白介质为pH=6.8磷酸盐缓冲液。
样品溶液的配制：
(1) 母液的配制
精密称取10mg药物活性成分（API）于100ml容量瓶中，用pH=6.8磷酸盐缓冲液溶解，超声30min，再用pH=6.8磷酸盐缓冲液定容至刻度，摇匀，作为母液（100μg/ml）。
(2) 两个浓度溶液的配制
7μg/ml溶液的配制：从母液中移取7ml至100ml容量瓶中，用pH=6.8磷酸盐缓冲液定容至刻度，制成7μg/ml的溶液。
4μg/ml溶液的配制：从母液中移取4ml至100ml容量瓶中，用pH=6.8磷酸盐缓冲液定容至刻度，制成4μg/ml的溶液。
(3) 空白辅料溶液的配制
根据表2-1处方称取辅料于100ml容量瓶中，超声30min，用pH=6.8磷酸盐缓冲液定容至刻度线。取约10ml上述溶液于离心管中，离心15min，使溶液至澄清。移取上清液1ml于10ml容量瓶中，用pH=6.8磷酸盐缓冲液定容至刻度。
表2-1 空白辅料处方
空白辅料 处方量
糖丸芯 3g
Talc 0.8g
HPMC 0.04g
合计：3.84g
将上述溶液在200-400nm的波长范围下进行紫外扫描，结合API和辅料在200-400nm范围下的波长吸收，应尽可能减小辅料对主药的影响的情况下，选择合适的测定波长。
2.2.2 检测波长确定的结果
因为不清楚API在不同波长下的吸光度，首先，选用了配制的浓度为7μg/ml的溶液，用紫外进行测定吸光度，在200-400nm波长范围内进行扫描。测定结果如图2-1所示,由此可知，7μg/ml的溶液，测定的吸光度偏大，范围超出0.2-0.8，所以7μg/ml不合适。因此，根据上述实验，理论上选用4μg/ml的溶液的吸光度值较为理想。
图2-1 7μg/ml紫外扫描图
表2-2 7μg/ml溶液不同波长吸光度值
编号 波长(nm) 吸光度(Abs)
1 319.40 0.035
2 289.00 0.128
3
4
5 218.00
316.80
258.60 0.991
0.029
0.044
将配制的4μg/ml的溶液进行吸光度的测定，测定结果如图2-2所示。由图2-2可知，测定的吸光度范围在0.2-0.8范围内，所以，和理论估计一样，4μg/ml是合适的浓度。由表2-3可知，测得的最大吸收波长是218nm。但是，我们需要结合辅料对API的影响，应当在减小辅料影响的基础上选择合适的波长。因此，要选择合适的波长，需要知道辅料在200-400nm波长范围内的吸收。空白辅料在200-400nm范围内的波长吸收，由图2-3可知：
图2-2 4μg/ml紫外扫描图
表2-3 4μg/ml溶液不同波长吸光度值
编号 波长(nm) 吸光度(Abs)
1 331.20 -0.001
2 319.40 0.019
3
4
5
6
7 288.80
218.00
333.40
316.80
258.60 0.071
0.563
-0.003
0.016
0.022
图2-3 空白辅料紫外扫描图
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