电子恒温不锈钢水浴锅 HHS-2S 上海宜昌仪器纱筛场

高速离心机 D-37520 德国海拉斯公司

凝胶成像分析仪 ChemiDoc MP 美国伯乐公司

电泳仪 PowerPac Basic 美国伯乐公司

PCR扩增仪 Veriti 美国应用生物系统公司

电子天平 MP4002 上海恒平科学仪器有限公司

电子分析天平 BSA224S 赛多利斯仪器有限公司

高压灭菌锅 MLS 3780 日本三洋公司

高速冷冻离心机    Centrifuge 5430R 艾本德仪器有限公司

恒温培养箱 DNP-9052 上海精宏实验设备有限公司

全温摇瓶柜 HY  G-A 太仓市实验设备厂

超净工作台 SW-CJ-1F 苏州安泰净化厂

1.1.4实验方法

本次研究从河南花田土中筛选分离，得到一株高效生物絮凝剂产生菌。经鉴定，为弯曲芽孢杆菌。以细菌16S rRNA通用引物，对该株弯曲芽孢杆菌的基因组进行PCR扩增，并从pH，碳源和氮源等方面分析该菌株产絮凝剂的最佳条件。

1.1.5絮凝活性的测定方法

⑴在100 ml小烧杯中称取0.3 g高岭土，加入100 mL小烧杯中，加入60 ml去离子水，用玻璃棒搅拌均匀，再加入100 ul提菌液，并再次用玻璃棒搅拌均匀，静置2 min后，取上层液[9]。

⑵在100 ml小烧杯中称取0.3 g高岭土，加入100 ul小烧杯中，加入60 ml去离子水，用玻璃棒搅拌均匀，加入1 ml的CaCl2溶液，CaCl2溶液浓度为1％，再加入100 ul菌液，并再次用玻璃棒搅拌均匀，静置2 min后，取上层液。文献综述

将所取上层清液用紫外分光光度计（UV-7504）测定吸光值OD550,加入高岭土的蒸馏水的吸光值作为空白对照[10]。

将空白对照的的OD550 记作 A，所取上层清液的OD550记作 B[11]。则可得样品的絮凝率的计算为：

F = (A－B)/A × 100%

1.2微生物絮凝剂产生菌的筛选与纯化

1.2.1微生物絮凝剂产生菌的筛选与纯化

将实验样品土壤用无菌水梯度稀释，稀释成浓度分别为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7的样品溶液。将样品溶液涂布在涂布已提前制备的LB培养基上。在恒温培养箱内，在37 ℃的条件下进行倒置培养，培养24 h。

24 h后取出培养基进行观察，此时菌落表面光滑，边缘规整，带有黏性，湿润且扁平。此类菌种为所需要分离的，具有絮凝活性的菌种，挑取分离单独培养。

将稀释平板法所筛选出的菌种，在LB固体培养基上通过四区划线的方法多次筛选，分离纯化，最终得到纯种菌种。将所得菌种富集培养。

1.3菌种总DNA提取 

1.3.1实验试剂盒

试剂盒：细菌基因组DNA提取专用试剂盒  

型号：离心柱型50preps

厂家：TIANGEN生化科技公司

1.3.2操作步骤  多糖类生物絮凝剂功能菌的挖掘(4):http://www.751com.cn/yixue/lunwen_78890.html