1.2 主要仪器与设备
由梅特勒-托利多仪器有限公司生产的PL601-L型号的电子天平；由江苏省金坛市医疗仪器厂生产的80-2型号的离心沉淀器；由上海一恒科技有限公司生产的LRH系列的生化培养箱；由上海一恒科技有限公司生产的SYQ-DSX-280B型号的不锈钢压力蒸汽灭菌器；由北京科伟永兴仪器有限公司生产的101-型电热鼓风干燥箱；由苏净集团苏州安泰空气技术有限公司生产的SW-CJ-2FD型洁净工作台；由河南新飞电器有限公司生产的BC/BD-426HY型号的冰柜。
1.3 主要方法
1.3.1 大曲芽孢菌的富集培养与分离
1.3.1.1 芽孢菌的富集培养
在无菌操作条件下，用无菌小刀分别挖取少量曲块，磨碎混匀，取10 g移至100 mL无菌生理盐水中，在电炉上80℃条件下加热8 min，杀死非芽孢菌体，取 1 mL 上述菌液加入富集培养基中，37℃恒温培养 2 d，富集芽孢杆菌[6]。
1.3.1.2 芽孢菌的分离纯化
吸取 1 mL富集培养液注入装有 9 mL无菌水的试管中，并做梯度稀释。取10-2、 10-3、10-4梯度进行划线培养， 37 ℃培养约2-3 d 后，在培养基中筛选单菌落较大的优势芽孢菌和具有明显特征的单菌落进行编号，分别纯化后低温保藏备用[6]。
1.3.2 大曲芽孢菌的鉴定
采用形态学和生理生化、分子生物学鉴定方法对分离出的芽孢菌进行鉴定。
1.3.2.1 形态学观察
1.3.2.1.1 菌体特征观察
使用牛肉膏蛋白胨培养基培养 3 d 后观察其菌落特征，采用革兰氏染色并用油镜观察菌体形态特征。
1.3.2.1.2 菌落特征观察
将待检测菌接种在牛肉膏蛋白培养基中，在37℃条件下培养 3 d 后，观察菌落特征。
1.3.2.2 生理生化特性测定
1.3.2.2.1 糖醇发酵试验
选取葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、半乳糖、果糖、阿拉伯糖以及山梨醇进行试验。将培养18-24 h的幼龄菌种接种一环到上述各培养基中，适温培养3-5 d，观察指示剂是否由紫色变黄，杜氏管中是否有空气[9]。
1.3.2.2.2 淀粉水解（淀粉培养基）
将菌种接种在淀粉培养基上，37℃培养 3 d 后，在菌落周围滴加碘液，如菌落周围呈现透明圈则表示菌种产生淀粉酶，若无透明圈则说明该菌株不产淀粉酶[9]。
1.3.2.2.3 明胶液化（明胶培养基）
将培养18-24 h 的芽孢菌以穿刺法接种于明胶液化培养基中央，于37℃培养。 若培养基液化则为阳性，否则为阴性[9]。
1.3.2.2.4 硝酸盐还原（硝酸盐还原培养基）
将菌种接种在硝酸盐还原液体培养基中，37℃培养 3 d后，取1 mL 培养液加入干净试管中，随后加入硝酸盐还原试剂甲液和乙液各2滴，观察反应现象，如管中液体变为红色，即为阳性。
1.3.2.2.5 过氧化氢酶试验(基本培养基)
取一环培养18-24 h的芽孢菌，涂在干净的载玻片上，再在上面滴1滴5％的H2O2，若有气泡（氧气）出现，则为过氧化氢酶阳性，无气泡者为阴性[9]。
1.3.2.2.6 需厌氧试验（还原剂培养基）   
将1环菌液穿刺接种到还原剂培养基管底。37℃培养2-5 d观察结果，如细菌在琼脂柱表面上生长者为好氧菌，如沿着穿刺线生长者为厌氧菌或兼性厌氧菌[9]。
1.3.2.2.7 耐盐性试验（不同盐浓度培养基）
根据鉴定需要，在牛肉膏蛋白胨液体培养基中加入不同浓度的NaCl溶液，如2％、4％、6％、8％、10%等。培养基要求澄清，接种时应采用幼龄菌接种，适温培养3-5 d，目测生长情况[9]。
1.3.2.2.8 生长温度试验（基本培养基）
    测定细菌的生长温度，要求培养液十分澄清，并采用液体菌种直接接种，放置于恒温水浴培养。在指定温度下培养2-5 d，观察生长情况。若在接近0℃的低温培养，则观察时间可延长7-10 d或更长。培养5 d能生长者按生长计算，否则按不生长计算，可疑者需重新进行培养试验[9]。 大曲中芽孢菌的分离及其功能特性研究(3):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_35623.html