金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是自然界中存在量很大的一种可致病细菌，也是污染食品及加工食品本身很常见的腐败细菌之一[6]。金黄色葡萄球菌普遍散布于自然界中，空气、土壤、水、人和动物的排泄物中都存在，由于它广泛的存在，危害食品的机会较多，其中肉制品、奶制品、豆制品及豆类这些较适合金黄色葡萄球菌的生长繁殖，金黄色葡萄球菌还会产生肠毒素[7]。在世界范围内，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒在细菌性食物中毒中均占有较大比例。该菌主要存在于皮肤、粘膜，特别是鼻咽部， 30%~ 80%的人群为该病原菌的携带者[8]，因此，金黄色葡萄球菌危害食品的机会较多。日本的调查结果表明，平均32.5%的食品存在金黄色葡萄球菌的污染，生奶的带菌率可达76. 3%，它可以引发很多种人畜共患病，是一种严重危害人类健康及畜牧业生产的致病菌[9]。因此，将金黄色葡萄球菌作为抑菌对象来研究一种新型防腐剂，对抑制金黄色葡萄球菌对食品的污染具有紧迫的现实意义。

本实验研究放线菌L-2发酵液不同萃取物对金黄色葡萄球菌的抑制活性，选择出有效果的萃取剂，在此基础上研究对菌体细胞膜的损伤作用，以期探讨放线菌L-2对金黄色葡萄球菌的抑制机理，为开发以放线菌L-2发酵液为原料的防腐剂的抑菌作用提供依据。 

2实验材料与方法

2.1菌种

试验菌种：放线菌L-2；致病菌：金黄色葡萄球菌

2.2培养基

金黄色葡萄球菌培养使用营养肉汤培养基(NB培养基)，放线菌L-2培养使用高氏一号培养基。

营养肉汤培养基：蛋白胨10g；牛肉膏3g；氯化钠5g；蒸馏水1000mL；pH7.4

将上述培养基，分装于250ml锥形瓶中，每个锥形瓶分装150ml的培养基后于高压蒸汽锅灭菌，121℃灭菌15分钟。

高氏1号培养基：可溶性淀粉 2g；KNO3 0.1g；K2HPO4 0.05g；MgSO4• 7H2O 0.05g；NaCl 0.05g；FeSO4• 7H2O 0.001g；琼脂 2g；蒸馏水 100ml；pH 7.2～7.4；灭菌。

在配制培养基的过程中，将淀粉与少量的冷水混合然后均匀搅拌，然后加入沸水，此时淀粉糊化，放置在电炉上加热，在加热过程中一边均匀的搅拌一边加入其它的成分，充分搅拌直至溶解以后，加水至100ml，此时校正pH，然后于高压蒸汽锅121℃灭菌15min，倒平皿前加入10%酚2滴至100ml培养基中混匀，将培养基倒入平皿内约15ml/皿。

2.3实验方法

2.3.1放线菌L-2发酵液的制备

在放线菌L-2的斜面培养物上面使用接种环从斜面上沾取少许L-2放线菌菌落，在液体培养基中轻轻震荡，轻轻搅拌使其均匀的分布。将放线菌L-2接种于高氏一号培养基后，置恒温摇床（28℃、120r/min)发酵5d。发酵完成后，将发酵液经抽滤除去菌丝和孢子，制得发酵液。

2.3.2 L-2发酵液中抗菌物质的萃取

将放线菌L-2的无菌发酵液分别与极性不同的有机溶剂石油醚、乙酸乙酯、正丁醇[10]以发酵液与有机试剂体积比1:1 萃取3次。将3次萃取液合并后在50℃下，真空浓缩干燥，用质量分数1.5%的吐温-80水溶液溶解萃取物，制成质量浓度为10mg/mL的原液。分别测定不同萃取物的抑菌效果论文网，以此选定最佳萃取溶剂。以1.5%的吐温-80水溶液作为阴性对照组，以0.005%的结晶紫溶液作为为阳性对照组。

2.3.3最小抑菌浓度的测定 （MIC）

筛选出抑菌活性最强的有机相，采用牛津杯法测定其MIC[11]。将已灭菌的琼脂培养基加热到完全融化，进行倒平板操作： 

1、将装有培养基的培养皿冷却以后，拔出棉塞。准备好要到平板的培养皿，放置于火焰旁边。 放线菌L-2发酵液萃取物对金黄色葡萄球菌的抑制作用研究(2):http://www.751com.cn/shiping/lunwen_45438.html