向日葵花盘亦可称为向日葵花托、向日葵饼、葵花盘和葵房,其甘甜、无毒、性寒,主要有止痛、止血、清热、平肝这些功能,可以用于治疗耳鸣、头晕、高血压、关节炎、脘腹痛等疾病[4]。
经过研究报道向日葵盘中可以检测出含有黄酮这类的化合物,而这类化合物具有非常大的清除活性和抗氧化能力,许多植物中都普遍存在这种化合物。它不仅可以防止自由基对人体产生的各种不良反应如诱导细胞产生癌变,还具有降低胆固醇的含量、对血液的循环有一些作用[5]。因为超声波具有破碎细胞的作用,并且可以强化传质,因此超声波技术是近年来最为科学的一种提取分离技术。通过超声波提取,溶剂分子更容易渗透到组织细胞中并充分融合,因此细胞中的可溶性成分便能够更好的释放出来[6]。
目前,已有对蒙古自治区河套地区向日葵盘总黄酮工艺及其含量测定的研究和报道[7],陕西葵花叶中绿原酸微波辅助提取及抗氧化性的研究[8],花盘中含有的果胶、多糖、绿原酸的提取液均有报道[9,10],但还未见到关于用超声辅助不同提取剂对扬州向日葵盘依次提取的成分分析及抗氧化活性研究。本文的目的在于为合理开发利用向日葵盘资源提供理论依据。
2. 实验部分
2.1 材料、仪器与器材
材料:2014年10月采摘于扬州。
仪器:500克摇摆式高速万能粉碎机、LJG-18S冷冻干燥机(河南兄弟仪器设备有限公司)、超低温冰箱、T-214电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)、多用途恒温超声波提取机(上海比朗仪器有限公司)、旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)、气相色谱质谱联用仪GCMS-QP2010、SHZ-D(111)循环水式多用真空泵(巩义市科瑞仪器有限公司)、紫外分光光度计(上海棱光技术有限公司)、数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)、高效液相色谱仪(HPLC)(Agilent Technologies 1260 Infinity)。
试剂:乙酸乙酯、丙酮、95%乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、无水碳酸钠、无水乙醇、邻二氮菲、氢氧化钠、硫酸亚铁、乙腈、甲醇、30%过氧化氢、浓盐酸、DPPH(1,1-二苯-2-苦肼基C18H12N5O6) (美国Sigma)均为分析纯;芦丁标准品、焦性没食子酸(邻苯三酚,C6H6O3)(天津市巴斯夫化工有限公司)、没食子酸、福林酚试剂(上海荔达生物科技有限公司)、三羟甲基氨基甲烷、磷酸缓冲溶液、Tris-HCl缓冲溶液。
2.2 黄酮的提取
将新鲜采摘的向日葵清洗干净,用摇摆式粉碎机粗粉碎后冷冻干燥48h后,粉碎。准确称取100.0g向日葵盘粉末于超声器皿中,先用适量乙酸乙酯,在超声条件为输出功率60%、超声时间2s、间隙时间3s下连续工作30分钟后,抽滤,平行三次,将滤液合并后,用丙酮再次超声滤渣,方法同上,留液去渣。将滤液进行旋转蒸发,待蒸发的溶液体积小于50ml容量瓶时,将溶液转入50ml容量瓶中,并用95%的乙醇定容成相当于原材料的2.000g/mL待测样品。
2.3 提取液成分分析
2.3.1 液相色谱分析
2.3.1.1 吸收波长的选择
以95%乙醇为参比溶液,用紫外分光光度计分别对两种提取液进行全波长扫描,得乙酸乙酯提取液最大吸收波长为207nm,丙酮提取液最大吸收波长为211nm。
2.3.1.2 流动相的选择
色谱柱为C18柱,以不同配比的流动相对两种提取液依次进行测定,配比为甲醇与0.1%醋酸(0~20:100~80)和乙腈与0.1%磷酸(0~30:100~79),以不同的进样量在0.5ml/min的流速条件下测定,择优选取。
2.3.2 气质联用分析
色谱柱:RTX-1MS(30 m×0.25mm,0.25μm);柱温:50℃;升温速度:以5℃/min 升至280℃保持25min;进样口温度:280℃ ;进样方式:不分馏;柱流量:1.27ml/min。