离子源为EI;电子能量70eV;离子源温度:200℃;接口温度:200℃;检测器电压:0.9KV ;扫描方式:Scan ;扫描质量范围:35~1000;进样量:1uL。
定性分析:采用GCMS Postrun Analysis化学工作站和NIST02谱图库等方法公共确定。
定量分析:采用峰面积归一化法检测出各成分的相对百分含量。文献综述
2.4 黄酮测试方法[11]
2.4.1 溶液的配制
芦丁标准溶液:准确称取芦丁标准样品0.0120g,用30%乙醇充分进行定容,定容于100ml的容量瓶中,使芦丁标准溶液为0.120mg/ml。
NaOH溶液:准确称取4.000gNaOH于100ml的容量瓶中,以蒸馏水定容,得到浓度为4%NaOH溶液。
NaNO2溶液:称取0.5150g的NaNO2于10ml的容量瓶中,以蒸馏水定容,得到浓度为5%NaNO2的溶液。
Al(NO3)3溶液:称取1.030gAl(NO3)3于10ml的容量瓶中,以蒸馏水定容,得到浓度为10%Al(NO3)3的溶液。
2.4.2 芦丁标准曲线的绘制
采用黄酮与Al3+会显色的方法进行黄酮的含量测定,分析方法为紫外/可见分光光度计法。首先,用移液管准确移取芦丁标准溶液3.00ml,移至10ml的容量瓶中,依次分别加入5%NaNO2溶液0.30ml,摇晃混匀后放置6min,然后再次加入浓度为10%Al(NO3)3溶液0.30ml,摇晃均匀,继续放置6min。之后加入浓度为4%NaOH溶液4.00ml,用浓度30%乙醇定容,充分摇匀溶液。以空白试剂作为参比溶液,静置10min后用紫外/可见分光光度计测定溶液在不同的波长下的吸光度,确定其最大吸收波长,结果见图1。
标准芦丁溶液紫外吸收曲线芦丁标准溶液吸收曲线源]自=751-·论~文"网·www.751com.cn/
用移液管准确移取0.00ml、1.00ml、2.00ml、3.00ml、4.00ml、5.00ml的芦丁标准溶液,分别置于10ml的容量瓶中,依次加入5%NaNO2溶液0.30ml,然后摇晃均匀,放置6min后再次加入10%Al(NO3)3溶液0.30ml,迅速摇匀,继续放置6min。之后加入4.00ml的浓度为4%的NaOH溶液,最后用30%乙醇定容至刻度,摇匀。以空白试剂作为参比溶剂,等待10min后,在图1确定的最大吸收波长为370nm处用紫外/可见分光光度计测定各个样品。以芦丁标准样品的浓度C作为横坐标,吸光度A作为纵坐标绘制标准曲线,结果见图2。
将芦丁标准溶液的吸光度实验数据进行线性拟合,得到线性拟合方程为:Y=45.6X-0.150,R=0.99937。
2.4.3 黄酮含量测定
依次分别取向日葵盘的乙酸乙酯提取液(稀50倍)、丙酮提取液(稀25倍)1.00ml于10ml的容量瓶中,按2.4.2的方法,测定样品溶液的吸光度。根据芦丁标准曲线所得的方程,计算黄酮在提取液中的含量。平行测定三次。