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摘要卵巢癌是目前妇科恶性肿瘤中死亡率最高的疾病,约70%的患者在后期才被诊断出来,导致治疗效果不佳。现已发现各种人类癌症，尤其是女性卵巢癌中，蛋白质二硫键异构酶（PDI）的表达水平出现异常增加。因此，选择安全有效的小分子PDI抑制剂是现在卵巢癌治疗的重要途径之一。本课题在前期已完成抗PDI因子的化学合成并成功敲除大肠杆菌的dsbA基因的基础上，采用构建报告基因和基因置换等一系列手段获取hPDI基因并插入ble抗性基因，进而构建重组菌体JCB816-ΔdsbA-hPDI，为后期的PDI抑制剂活性筛选做好准备。19106
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关键词 卵巢癌 抗PDI因子 质粒构建 基因重组
毕业设计说明书（论文）外文摘要
Title The construction of an anti-PDI factor Biological testing system
Abstract
Ovarian cancer is one highest mortality disease in the gynecologic malignancies at present. Approximately 70% of patients are diagnosed at a later stage, leading to poor treatment. It has been found in various human cancers, especially ovarian cancer, the expression level of PDI (protein disulfide isomerase) is increased dramatically. So, screening safe, effective and selective small-molecule PDI inhibitor for ovarian cancer treatment shows urgent. On the basis of the chemical synthesis of the anti-PDI factor and knockout of the E.coli dsbA gene successfully in the early studies, constructing target report gene and gene replacement to get hPDI gene and insert resistance gene ble were used here，and finally construct the recombinant bacteria JCB816-ΔdsbA-hPDI. These above studies supply us one method to screeing PDI inhibiros.
Keywords ovarian cancer anti-PDI factor plasmid construction gene recombinent
目次
1.绪论 1
1.1 卵巢癌简介 1
1.2 蛋白质二硫键异构酶（PDI） 2
1.3 博来霉素抗性基因 3
1.4 本课题的研究目的及应用前景 4
2.实验 5
2.1 实验目的 5
2.2 实验原理 5
2.3 实验仪器和材料 6
2.3.1 实验仪器 6
2.3.2 实验材料 6
2.4 实验涉及的方法及技术 7
2.5 实验过程及操作 9
2.5.1 目的基因的获取 9
2.5.2 抗性基因(ble)的插入 15
2.5.3 重组获取目的菌体JCB816-ΔdsbA-hPDI 22
3.实验结果与讨论 26
3.1 PCR条件的摸索 26
3.2 RNA的提取 27
结论 28
致谢 29
参考文献 30
1.绪论
1.1 卵巢癌简介
卵巢癌，即卵巢恶性肿瘤，是女性生殖器官中最常见的肿瘤之一，发病率仅次于子宫体癌和子宫颈癌而位居第三位。但是卵巢癌的死亡率却居妇科恶性肿瘤之首，这主要是由于卵巢癌的早期临床症状隐匿，而又缺乏有效的早期诊断方法，约70%的卵巢癌病例在后期阶段才被诊断出来，导致治疗效果不佳[1]。早期卵巢癌患者5年内的生存率为70%—90%，而晚期卵巢癌患者5年内的生存率仅为20%，对妇女生命造成了严重威胁[2]。
卵巢癌早期一般情况下没有明显的症状，不易察觉，偶尔会出现腹部不适的感觉，但没有明显的腹痛；卵巢癌到达中期时会出现心悸/呼吸困难等现象，同时会引发消化不良/食欲不振等病症；而晚期的卵巢癌患者常表现为乏力、消瘦、贫血等症状[3]。