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摘要：海藻糖，又名覃糖，是由两个葡萄糖残基以α,α-１,１键联结而成的一种非还原性的双糖。本实验以实验室保藏的6种酵母菌为基础菌株，根据其海藻糖发酵产量筛选出海藻糖产量较高的菌种，然后对其进行紫外线物理手段的诱变，筛选出产量增加的菌株之后，采用亚硝酸进行化学诱变，筛选后，最终得到一株海藻糖产量提高的菌株，产量为1.469mg/mL，比出发菌株产量提高37%。并对该菌株进行遗传稳定性实验，证实该菌株连续传代十代，遗传稳定。21036
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毕业论文关键词： 海藻糖；酿酒酵母；紫外线诱变；亚硝酸诱变
Mutation screening of strains producing trehalose
Abstract：Trehalose, also known as tain sugar, glucose residues with alpha, is made up of two alpha 1, 1 key hole and become a kind of reducing disaccharides. The experiment on the basis of laboratory preservation of 6 kinds of yeast strains, trehalose according to its fermentation production trehalose production high were screened, then carries on the ultraviolet mutagenesis of physical means, screened yield increase after the strain of using nitrite to chemical mutagenesis, screening, finally get one of trehalose production increase of strain, trehalose production of 1.469 mg/mL, than the starting strain yield increased by 37%. And genetic stability of the strain experiment, confirmed the strain continuously extend the tenth generation, genetic stability.
KeyWords：trehalose；Saccharomyces cerevisiae；ultraviolet radiation; HNO2 mutation
目 录
1 绪论1
1.1 本课题的国内外研究进展1
1.1.1 酵母提取法 1
1.1.2 酶转化法生产1
1.1.3 利用工程微生物和转基因植物生产海藻糖1
1.1.4 发酵法生产海藻糖 2
1.2 本课题的研究内容、目的及意义3
2 材料与方法5
2.1 实验材料 5
2.1.1 实验试剂5
2.1.2 实验设备5
2.2 分析方法 5
2.2.1 定量测试方法5
2.2.2 标准曲线的制作6
2.3 实验方法 7
2.3.1 菌株初筛与纯化7
2.3.2 菌株诱变 7
2.3.3 遗传稳定性测定方法8
3 结果与讨论 9
3.1 标准曲线的制作9
3.2 菌种初筛的分离纯化结果9
3.3 紫外线诱变9
3.4 亚硝酸诱变12
3.5 遗传稳定性实验14
4 结论 15
5 心得与展望16
5.1 心得16
5.2 展望16
致谢17
参考文献18
1 绪论
1.1 本课题的国内外研究进展
海藻糖最初是 Wiggers 从黑麦的麦角菌中提取的, 随后发现它在自然界的动植物和微生物中广泛存在，在霉菌和酵母的休眠状态, 海藻糖作为贮藏糖类存在；在昆虫的血淋巴中含量较高,做为飞行能源。到20世纪90年代，随着对海藻糖独特的生物学性质及功能的发现，其逐渐受到各国的密切关注，有关海藻糖的研究结果及专利几乎每月都有发表。
我国近几年对于海藻糖的生产研究非常的丰富，例如最早是由我国毛忠贵，朱利丹，邓绍荣教授等研究出薄层层析法分析海藻糖[1]，解决了海藻糖不易与其他双糖分开的难题，建立了一种理想的海藻糖薄层层析定性分析方法。用此方法可检出２μｇ海藻糖，简单，快速，灵敏。
生产海藻糖的主要方法是酵母发酵法，因为此种方法被应用研发的最早，并且简单易懂。之后为了提高产量逐渐研发出来酵母提取法，酶转化法等等方法，甚至用基因工程合成海藻糖的生产植物或者菌株。
1.1.1 酵母提取法
由于酵母细胞中海藻糖含量相对较高且提取简单，因此从面包酵母中提取海藻糖仍是目前生产海藻糖较为重要的方法。酵母中海藻糖的提取是用酒精抽提法。上世纪四十年代，欧美从面包酵母中提取海藻糖取得成功，并建立了一套用酒精提取面包酵母结晶分离海藻糖的方法，至今它仍为从酵母提取海藻糖的较为重要的方法。