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    5’-RACE-Ready cDNA    3’-RACE-Ready cDNA
    总RNA          1.0-2.75μL(1μg)
    5’-CDS Primer A   1.0μL
    Deionized H2O    Up to 3.75μL    总RNA          1.0-2.75μL(1μg)
    5’-CDS Primer A   1.0μL
    Deionized H2O    Up to 3.75μL
        3.轻轻弹管壁使其混匀。72摄氏度温育3分钟,再42摄氏度温育2分钟,14000 g离心10秒。
        4.在5'-RACE-Ready cDNA中加入1μL SMARTer IIA oligo,在充分混匀之后离心。
        5.准备Marster Mix:
           Buffer Mix(来自第1步)           4μL
           RNase Inhibitor (40 U/μL )      0.25μL
           SMART Scripe RTase(100 U)        1μL      
           总体积                           5.25μL
        6.将5.25微升的Master Mix分别加入两个管中。
        7.轻轻混匀,短暂离心,42摄氏度温育90分钟, 70摄氏度温育10 分钟。
        8.加入20微升Tricine-EDTA Buffer,置于-20摄氏度保存备用。
    1.5 PCR反应
    1.5.1普通PCR反应
        普通PCR反应体系:
                cDNA模板                        1μL
                Premix Taq                      12.5μL
                上游引物(10μmol/L )             1μL
                下游引物(10μmol/L )             1μL
                ddH20                           9.5μL        
                总体积                          25μL

    1.5.2 RACE PCR反应
        RACE PCR反应体系:
                10x LA PCR buffer                2.5μL
                MgCl2 ( 25 mM )                  2.5μL
                dNTP Mixture(各2.5 mM)           4μL
                UPM/NUPM                         2.5μL
                GSP/NGSP(10mmol/L)               0.5μL
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