菜单
  
    摘要:Siva-1是Siva促凋亡蛋白家族中的重要组成之一,在多种细胞信号通路和细胞凋亡过程中起到重要作用。目前关于Siva-1基因在哺乳动物卵巢颗粒细胞中作用的研究还未见报道。本文根据猪Siva-1编码区序列设计了特异的siRNA,转染体外培养的猪卵巢颗粒细胞,采用qRT-PCR和western blot技术检测敲减效果,流式细胞技术检测Siva-1敲减后猪卵巢颗粒细胞凋亡率,qRT-PCR检测Siva-1靶基因Bcl-2表达水平。结果显示:转染Siva-1-siRNA后猪卵巢颗粒细胞中Siva-1基因mRNA水平显著下调(P<0.05),Siva-1蛋白水平极显著下调(P<0.01),说明设计的Siva-1-siRNA可有效敲减猪卵巢颗粒细胞中内源性Siva-1的表达;流式细胞技术发现Siva-1敲减后猪卵巢颗粒细胞凋亡率和早期凋亡率极显著下降(P<0.01),但晚期凋亡率差异不显著(P>0.05);敲减Siva-1后猪卵巢颗粒细胞中Siva-1靶基因Bcl-2表达水平极显著上调(P<0.01)。结果表明Siva-1是猪卵巢颗粒细胞的促凋亡因子,可能通过抑制抗凋亡关键因子Bcl-2来发挥作用。26242
    毕业论文关键词:Siva-1;Bcl-2;卵巢颗粒细胞;细胞凋亡;
    The role of Siva-1 in porcine ovarian granulosa cell apoptosis
    Abstract: Siva-1 is one of the important components of the Siva proapoptotic protein family and plays an important role in a variety of cellular signaling pathways and apoptosis. There are few studies on the mechanism of Siva-1 gene on ovarian granulosa cells. We designed a specific siRNA according to the coding sequence of the pig Siva-1 gene, transfected porcine ovarian granulosa cells cultured in vitro. qRT-PCR and western blot were used to dectect the effect of Siva-1 knockdown, Flow cytometry was used to detect the apoptotic rate of ovarian granulosa cells after Siva-1 knockdown, qRT-PCR were used to detect Siva-1 target gene Bcl-2 expression level. The results showed that after Siva-1-siRNA transfected in, mRNA level of Siva-1 in porcine ovarian granulosa cells decreased significantly(p<0.05), protein level of Siva-1aslo decreased significantly(P<0.01), indicates that the Sivc-1-siRNA we designed can effectively decrease the endogenous Siva-1 expression level ; Flow cytometry showed that the apoptosis rate and early apoptosis rate of porcine ovarian granulosa cells were significantly decreased after Siva-1 knockdown (P <0.01), while no siginicant difference in late apoptotic rate(P>0.05);The expression level of Siva-1 target gene Bcl-2 in ovarian granulosa cells was significantly up-regulated after Siva-1 knockdown (P <0.01). Our results showed that Siva-1 was a pro-apoptotic factor of porcine ovarian granulosa cells, may play its role by inhibiting the key anti-apopotic factor Bcl-2.
    Key words: Siva-1; Bcl-2; granulosa cells; apoptosis;
    目  录
    摘要3
    关键词3
    Abstract3
    Key words3
    引言3
    1□材料与方法4
    1.1□引物设计与合成4
    1.2□干扰RNA的合成4
    1.3□转染5
    1.4□RNA提取5
    1.5□RNA反转录5
    1.6□荧光剂实时定量PCR检测5
    1.7□Western blot5
    1.8□AnnexinV-PI染色6
    1.9□数据统计与分析6
    2□结果与分析6
    2.1□PCR产物检测6
    2.2□Siva-1-siRNA对猪卵巢颗粒细胞中Siva-1基因mRNA表达的影响7
    2.3□Siva-1敲减对猪卵巢颗粒细胞中Siva-1蛋白表达的影响7
    2.4□Siva-1敲减对猪卵巢颗粒细胞中细胞凋亡率的影响8
    2.5□Siva-1敲减对猪卵巢颗粒细胞中Bcl-2基因表达的影响9
    3□讨论9
    致谢10
    参考文献10
    Siva-1在猪卵巢颗粒细胞凋亡中的作用
    引言
    猪卵巢卵泡主要由卵母细胞、体细胞(如颗粒细胞和卵泡膜细胞等)和卵泡液等组成,其中颗粒细胞能够合成和分泌多种活性肽如抑制素、卵泡抑素和激活素等,这些活性蛋白不仅参与调节垂体释放卵泡刺激素(FSH),而且可以作为卵泡发育的局部调节因子,对卵泡的成熟发育起着至关重要的作用。在大多数哺乳动物体内,有70-99.9%的卵泡在排卵前就发生卵泡闭锁,只有少数卵泡细胞最终能够进行排卵。研究表明,在卵泡发生闭锁的过程中,颗粒细胞也产生相应变化,例如颗粒细胞核发生固缩,细胞质内出现空腔,颗粒细胞与周围细胞分离脱落,分解形成闭锁小体,即颗粒细胞凋亡。随着深入研究发现,颗粒细胞凋亡现象的发生早于卵泡闭锁,并进一步证实卵泡闭锁是由于颗粒细胞凋亡引起的。在猪卵巢卵泡闭锁过程中,促凋亡基因Caspase3、BAX和BIM的表达水平显着上调,而抗凋亡基因BCL-2和MCL-1显著下调[1]。卵巢颗粒细胞凋亡能够引发卵泡闭锁,同时卵泡的选择也依赖于颗粒细胞的凋亡。因此,探索颗粒细胞凋亡的作用机制对于调控猪卵泡发育和提高猪繁殖力等有着重大的意义。
  1. 上一篇:外界环境的变化对蛋鸡产蛋率的影响分析
  2. 下一篇:猪GPC4基因SNP检测及其与肉质性状关联分析
  1. Tas1r1鲜味基因在脊椎类动物中的进化规律分析

  2. 高光谱成像技术在豆奶粉...

  3. 石墨毡电极的改性及其在...

  4. GASBD基因在马铃薯中的表达...

  5. GASBD2基因在马铃薯中的表...

  6. glgB/GASBD融合基因在马铃薯...

  7. 玉米GRAS基因家族在植物中的进化析

  8. 大众媒体对公共政策制定的影响

  9. java+mysql车辆管理系统的设计+源代码

  10. 杂拟谷盗体内共生菌沃尔...

  11. 当代大学生慈善意识研究+文献综述

  12. 十二层带中心支撑钢结构...

  13. 河岸冲刷和泥沙淤积的监测国内外研究现状

  14. 酸性水汽提装置总汽提塔设计+CAD图纸

  15. 中考体育项目与体育教学合理结合的研究

  16. 电站锅炉暖风器设计任务书

  17. 乳业同业并购式全产业链...

  

About

751论文网手机版...

主页:http://www.751com.cn

关闭返回