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    1.实验部分
    1.1 实验所用仪器及试剂
        仪器:刀片 ;  PDA 平板 ;  摇床 ; 离心机 ;血球计数板 ;    
               塑料盒 ; 激光共聚焦显微镜 ;接种环 ;冷冻切片机
         试剂:大丽轮枝菌;查氏培养液 ;蒸馏水  
    1.2 实验所用材料
        实验所用材料为感病棉花种子冀棉11和抗病棉花种子海岛棉7124,分别在玻璃温室中进行土培盆栽培养,选取第10真叶的主茎叶片(叶龄22天左右)为研究对象。
    1.3 实验过程
      (1)利用叶片外植体培养:用锋利刀片,将实验材料沿叶柄基部切下叶片,稍加修剪后水培;待叶柄长出根(长度5厘米)时,进行黄萎病侵染处理;
      (2)制备孢子悬浮液: 将放在-80℃保存的菌株,用PDA 平板活化3-4 d之   后,经过活化之后用接种环挑取菌块放入查氏培养液中,并将培养液放入25℃ , 220 r.min-1 的摇床上摇培5-6 d,经摇培之后再将培养液过滤, 并取5000g滤液放置在离心机中离心5 min, 弃上清液,用清水稀释孢子沉淀, 用血球计数板进行计数, 计数之后再将培养液浓度调至1×107 个孢子.mL-1;
      (3)接种:将调好浓度的孢子悬浮液加入空塑料盒中, 将叶片外植体培养的抗感病棉花的根浸根40 min,在浸根40 min按照一定操作进行接种;
      (4)接种后处理:将接种之后的叶片外植体转回至蒸馏水中25℃光照16 h,每盒种12 株苗。对照棉苗用清水浸泡40 min。于处理后0h,2h,4h,6h,8h 切下根尖(长度1厘米),进行微管的固定,冰冻切片,免疫染色。于激光共聚焦显微镜下观察并照相。
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