落日黄色素(分析纯),浓硫酸(分析纯),硼酸分析纯,盐酸(分析纯),0.1%甲基绿+0.5%溴甲酚绿 (1:1混合),无水乙醇(分析纯),氢氧化钠分析出,硫酸铜,蒸馏水。
分析天平(感量0.0001),烧杯,移液管(10mL),胶头滴管,容量瓶(1000mL 100mL),量筒(50mL),玻璃棒,酸式滴定管,试剂瓶,锥形瓶,
凯式定氮仪--------KDT(N)-04(08)A,C,D定氮仪(半自动)
消化炉--------KDT(N)-04消化炉。
1.2实验方法
1.2.1实验设计
玉米干秸秆处理:用粉碎机将干秸秆切碎,大概1-2cm的小段,用自来水浸泡一段时间后过滤,将湿润的秸秆放置在通风阴凉处自然风干12h,将粉干后的秸秆加入落日黄色素0.3g,装入试剂瓶中压实并进行密封,然后放置于保温箱中37摄氏度的环境中发酵15天。发酵结束,进行后续的实验工作。
1.2.2蛋白质含量的测定
发酵后样品的消化
称取发酵后试样5g(精确度0.0001),放入消化管中,称取硫酸铜催化剂10g放入消化管并与试样混合均匀。加入浓硫酸50ml待样品焦化呈黑色,将消化管放入消化炉上,打开抽气三通进水(自来水)使抽气三通处于吸气状态,接通电源,打开各自控制开关,调节电位器使指示电压220V,开始消化。刚开始消化管内有液体飞溅并有大量的泡沫,待泡沫消失后,直至管内液体呈透明的橙黄色,继续消化5h。消化后,自然冷却,冷却后将样品用蒸馏水定容至500ml容量瓶内,密封保存[1]。
蒸馏
第一步 蒸馏前准备
用橡胶管连接仪器侧面左下方各个相对应接口
(1)NaOH接口连接橡胶管,另一端连接装有40%NaOH的自备容器内
(2)H2O接口连接胶管后,胶管另一端连接装有蒸馏水的自备容器内
(3)冷却水接口连接胶管后,另一端与自来水龙头连接
(4)排水阀和出水口连接胶管,另一端放在下水道
第二步 蒸馏
使用KDT(N)-04(08)A,C,D定氮仪进行试样的蒸馏
(1)打开控制面板上的电源开关,仪器开始自动加水。
(2)打开面板上的蒸汽开关,仪器开始自动加热。直到蒸馏塑料管有蒸汽喷出并持续喷半分钟左右,关闭蒸汽开关,仪器处于待机状态。
(3)取定容后25ml的样品放在消化管内,并将消化管放置于蒸馏塑料管下端的弹簧平台上,上端要密封好。
(4)取10ml 2%的硼酸放与锥形瓶内,并用胶头滴管滴两滴甲基绿+溴甲酚绿混合指示剂2滴。将锥形瓶放置于蒸馏接收管下端的圆形托盘上。蒸馏接收管要在液面以下。
(5)打开面板上的水开关,加入20ml的蒸馏水,关闭水开关。
(6)打开面板上的NaOH开关,加入150ml的NaOH溶液,关闭此开关。
(7)打开蒸汽开关开始进行蒸馏。
(8)蒸馏5分钟,使蒸馏接收管处于液面以上,继续蒸馏一分钟,关闭蒸汽开关,结束蒸馏。
(9)取下锥形瓶时,要用蒸馏水将蒸汽就收管冲洗一遍,洗液流进锥形瓶内,锥形瓶内接收液待滴定。
(10)取下消化管时,打开水开关,使废液流出蒸汽塑料管,并用蒸馏水冲洗外侧。之后进行样品的第二次蒸馏,进行多次的数据比对。
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