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    1 实验部分
    1.1 实验所用材料、试剂及仪器
    材料:黑豆,低温烘干,粉碎备用。
    试剂:无水乙醇、磷酸氢二钠、高氯酸、三羟甲基氨基甲烷、盐酸、邻苯三酚、邻二氮菲、硫酸亚铁、30%过氧化氢、磷酸二氢钠、冰醋酸、氢氧化钠。
    仪器:AR124CN电子天平(奥豪斯仪器有限公司);SH2-D(Ⅲ) 循环水真空抽气泵(郑州市亚荣仪器有限公司);ZBE70-35制冰机(Ziegra-Eismaschinen GmbH);DHG-2150B电热鼓风干燥箱(郑州生元仪器有限公司);D8028TL-K4C格兰仕微波炉(格兰仕集团有限公司);HH-S4恒温水浴锅(巩义市予华仪器有限责任公司);V-5000可见分光光度计(上海元析仪器有限公司)。
    1.2 实验方法
    1.2.1皂苷测定
    1.2.1.1 标准液的配制
    以齐墩果酸为标准品,准确称取干燥至恒重的齐墩果酸对照品10 mg放入烧杯中,加无水乙醇,使之溶解,移动至10 mL容量瓶中,定容,摇匀即浓度为1 mg/mL的标准对照液。
    1.2.1.2 皂苷标准曲线的绘制[7]
    绘制标准曲线得到标准曲线方程:y=32.051x-0.0052,R=0.9976。
      齐墩果酸标准曲线
    1.2.1.3皂苷提取工艺流程
    流程如下:黑豆→干燥,去皮→粉碎过筛→微波辅助提取→提取液抽滤→浓缩→乙醇溶解定容→稀释→测定。
    1.2.1.4 皂苷提取率的测定
    取1 mL稀释样品液,置于具塞试管内,进行70℃水浴,待乙醇挥干,分别滴入0.2 mL 5%香草醛—冰醋酸溶液、0.8 mL高氯酸,混合均匀、置60℃恒温水浴中加热15 min,其后冰水冷却5 min,加入冰醋酸,5 mL,摇动均匀、以空白试剂做对照,在波长540nm处测定其吸光度。根据回归方程算出测量皂苷的C(μg/mL),按照以下公式计算提取物皂苷的提取率(%)。
    皂苷的提取率(%)=CVK×10-4/W
    1.2.2 单因素实验及正交试验
    分别以微波功率、料液比、乙醇浓度、微波时间做4个单因素实验,得出每一个实验的最佳皂苷提取率所对应的因素。为了确定四个因素同时对黑豆皂苷提取率的影响,采用L9(34)正交表[8]对以上4因素进行正交试验。
    1.2.3 抗氧化活性
    1.2.3.1 黑豆提取液对超氧阴离子自由基(O2-•)清除活性[9]
    1.2.3.2 黑豆提取液对羟自由基(•OH)清除活性[10]
    2 结果与讨论
    2.1 单因素试验
    2.1.1 微波功率的选择
    在乙醇浓度为70%,料液比1:15,微波2 min条件下,提取两次,抽滤,合并提取液,研究不同微波功率低火、解冻、中火、中高火、高火对黑豆皂苷提取率的影响。
    微波功率对黑豆皂苷提取率的影响
    由图1可知,微波功率对皂苷提取率影响在中高火时达到最大,功率加大提取率反而下降。原因是当微波辐射一定时,微波功率越高,单位时间内产生能量越多,物质升温越快,分子无规则运动越剧烈,扩散速度越大,溶解速率也越大,这样有利于皂苷的提取。当微波功率过高时,高温时物质内液体沸腾溢出,难以高效提取[11]。故波功率初步选择为中高火。
    2.1.2 料液比的选择
    在微波功率为中高火,乙醇浓度70%,微波时间2 min下,提取两次,抽滤,合并提取液,研究不同料液比1:10、1:15、1:20、1:25、1:30对其影响。
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