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图1 大豆各品种特征谱带电泳图…4
表1 SDS-PAGE试剂配方表…2
表2 大豆品种特征谱带统计…4
表 3 品种Jack品种内差异性统计…5
表4 4个品种纯度的统计结果5
表5 混合样品差异性统计结果（部分）5
表6 混合样品品种间差异统计6
蛋白质电泳法检测大豆种子品种真实性和纯度
大豆是重要的粮油作物，随着我国农业结构的改变，大豆在我国的农业生产中占据了越来越重要的位置。高产、优质、抗病的优良品种是大豆增产农民增收的重要前提。然而种子质量的优劣是品种特征特性能否充分发挥的关键[1],而种子纯度则是种子质量的重要指标。随着国际上一系列种子质量检验标准规定的出现，为了保证农民的利益，维护市场秩序和保护大豆新品种，对大豆品种鉴定和纯度分析具有十分重要的意义。
作物品种的真实性与纯度鉴定,实际上就是鉴定作物品种的基因型。近年来,生化技术广泛应用于农业,蛋白质电泳和同工酶电泳作为品种纯度鉴定的方法已经得到普遍重视,且逐步得到实际应用[2-5],种子贮藏蛋白和同工酶就是作物不同品种的基因直接表达产物,它们在数量、大小、种类及结构等方面的多样性一定程度上能反应不同品种DNA的组成差异。随着电泳技术的发展,电泳图谱技术也已逐渐应用到作物品种鉴定和纯度分析中来。这种电泳图谱多态性丰富,具有高度的环境稳定性和个体特异性,就象人的指纹一样,因此也被称为“指纹图谱(Fingerprinting)”[6]。
前人对蛋白电泳图谱技术已有大量的研究，王鹤娟[7]等通过SDS-PAGE电泳方法对杂交油菜种子中谷蛋白和球蛋白的电泳图谱进行了比较，发现谷蛋白的图谱多态性更强，在品种纯度鉴定中更具代表性；南京农业大学水稻所（1999）用SDS-PAGE法对杂交籼稻的 12 个保持系、18 个恢复系和23 个 F1的胚乳贮藏蛋白进行多态性分析，结果表明：谷蛋白较醇溶蛋白多态性丰富[8]；张谊寒[9]通过醇溶蛋白电泳对43份普通小麦的遗传差异和品种纯度进行分析。利用SDS-PAGE蛋白质电泳方法鉴定作物品种真实性和纯度，已在751椒[10]、啤酒大麦[11]、菜豆[12]中获得成功。
不同大豆品种种子的SDS-PAGE蛋白电泳图各自具有自己的特征性谱带,其谱带数目、宽窄、位置和颜色深浅都存在一定的差异[13]。利用这些差异,在同一实验条件下用SDS-PAGE蛋白电泳结果去鉴别大豆种子品种有理论和实验依据，但结果是否具有代表性还要根据实验结果来判断。
本研究通过对4种大豆品种单粒及混合样的SDS-PAGE电泳图谱分析，调查其品种种子纯度，学习并且熟悉品种纯度鉴定的实验操作和原理，了解一些当地种子市场的情况。作物品种种子纯度是种子质量的重要指标，研究调查并控制市场上的大豆种子品种纯度不仅能保证农民的利益，对于我国的大豆产业发展更是具有重要的影响。
1.材料与方法
1.1 植物材料与取样方法
本实验从南京市种子市场调查采购了Jack，大黄，猴毛和黄河四个大豆品种作为材料，先在每个品种中取10粒种子进行电泳以确定每个品种的特征谱带；然后从每个品种中随机取200粒种子刮取少量作为样品，在检测试验中则是每个品种取500粒种子并混入另外三个品种的种子共50粒，混匀后随机取100粒种子刮取少量作为样品，进行SDS-PAGE电泳实验。
1.2 蛋白质提取
1.2.1 SDS-PAGE相关试剂配方
表1 SDS-PAGE试剂配方表
试剂名称
Name of reagent 配制方法