2.3. 实验方法
2.3.1. 工艺流程 GC-MS ↑
缓冲液 预热←酶液 接种 萃取
↓ ↓ ↓ ↑
烟丝→预处理→预热→酶解→灭活→酶解液→灭菌→发酵→成品
↓
抽滤→滤液→测还原糖含量
2.3.2. 实验内容及步骤
2.3.2.1. 烟丝粉碎对比实验
提供的原料为烟丝,为了研究原料粉碎与否对酶解效果的影响,故将原料粉碎与不粉碎进行对比试验:取10g烟丝粉碎,分别准确称量1.000g烟粉于100mL三角瓶中,分别加pH4.0缓冲液10mL,加入0.04%纤文素酶(质量分数),未粉碎的烟丝也分别准确称量1.000g于100mL三角瓶中,分别加pH4.0缓冲液10mL,加0.04%纤文素酶(质量分数),同时于50℃水浴中分别酶解作用0.5、1.0、1.5、2.0h,3组平行。
2.3.2.2. 纤文素酶单因素实验
(1) 温度单因素
根据表2.1所列的温度单因素,在其它四个因素:pH值4.0、料液比1:10、加酶量0.04%、酶解时间1.0h的条件下进行温度单因素实验。精确称取样品1.000g,加入8mL缓冲液,并用缓冲液配制0.02%的纤文素酶液,酶液和样品置于对应温度的恒温水浴锅内预热30min后,取2mL酶液加入样品后,置于对应温度的恒温震荡水浴锅,计时酶解1.0h,3组平行。水解液根据2.4.1所述的DNS法测定还原糖含量。
(2) pH值单因素
根据表2.1所列的pH值单因素,在其它四个因素:温度50℃、料液比1:10、加酶量0.04%、酶解时间1.0h的条件下进行pH值单因素实验。精确称取样品1.000g,分别加入pH值为2.0、3.0、4.0、5.0、6.0缓冲液8mL,并用对应pH值的缓冲液配制0.02%的纤文素酶液,酶液和样品置于50℃的恒温水浴锅内预热30min后,取2mL酶液加入样品后,置于50℃的恒温震荡水浴锅,计时酶解1.0h,每个因素水平3组平行。水解液根据2.4.1所述的DNS法测定还原糖含量。
(3) 料液比单因素
根据表2.1所列的料液比单因素,在其它四个因素:温度50℃、pH值4.0、加酶量0.04%、酶解时间1.0h的条件下进行料液比单因素实验。精确称取样品1.000g,分别加入3mL、8mL、13mL、18mL、23mL、28mL缓冲液,并用缓冲液配制0.02%的纤文素酶液,酶液和样品置于50℃的恒温水浴锅内预热30min后,取2mL酶液加入样品后,置于50℃的恒温震荡水浴锅,计时酶解1.0h,每个因素水平3组平行。水解液根据2.4.1所述的DNS法测定还原糖含量。
(4) 加酶量单因素
根据表2.1所列的加酶量单因素,在其它四个因素:温度50℃、pH值4.0、料液比1:10、酶解时间1.0h的条件下进行加酶量单因素实验。精确称取样品1.000g,分别加入10mL、9mL、8mL、7mL、6mL、5mL缓冲液,并用缓冲液配制0.02%的纤文素酶液,酶液和样品置于50℃的恒温水浴锅内预热30min后,分别取酶液0mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL加入样品后,置于50℃的恒温震荡水浴锅,计时酶解1.0h,每个因素水平3组平行。水解液根据2.4.1所述的DNS法测定还原糖含量。
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