1.4 小麦生长指标的测定
小麦所测的生长指标包括根长、株高、茎粗、干重和湿重。根长、株高与茎粗采用细线与直尺相配合的方法进行测量。利用水遇热为水蒸气的原理,可用加热烘干法来测定植物组织的干重与湿重[8]。
1.4.1 小麦根长、株高、茎粗的测量
1.4.1.1 操作步骤
每盘轻拔出若干小麦,分别用细线量出小麦根长、株高的长度,并在细线上做好标记,然后用直尺测出所做标记的细线长度,并得出每盘小麦的平均根长、株高。把每盘所取的若干小麦横切,排成一排,测其直径总和,再计算出每株小麦的茎粗。
1.4.2 小麦干重、湿重的测定
1.4.2.1 操作步骤
(1)称量瓶的恒重:将洗净的8个称量瓶编号,放在105℃恒温烘箱中,烘两个小时左右,用坩埚钳取出放入干燥箱中冷却至室温后,在天平上称重。再于烘箱中烘两个小时,同样于干燥箱中冷却称重,如此重复两次(两次称重的误差不得超过0.002g),求得平均值为W1。
(2)将待测小麦叶片从植株上取下后迅速剪成小块,装入已知重量的称量瓶中盖好。在分析天平上准确称取重量,得瓶与鲜样品总量为W2,然后于105℃烘箱中干燥4~6小时(注意要打开称量瓶盖子)。取出称量瓶,待其温度降至60~70℃后,用坩埚钳将称量瓶盖上,放在干燥器中冷却至室温,再用分析天平称重,这样重复几次,直至恒重为止。称得重量是瓶与干样品总重量为W3。
1.4.2.2 结果计算
样品湿重(鲜重):Wf =W2-W1
样品干重:Wd=W3-W1
1.5 小麦生理指标的测定
所测小麦的生理指标有叶绿素含量、POD、SOD、CAT活性以及MDA含量。叶绿素含量测定采用分光光度法[9],POD活性测定采用愈创木酚法[9],SOD活性测定采用氮蓝四唑(NBT)光化还原法[10],CAT活性测定采用分光光度法[10],MDA活性测定采用分光光度法[10] 。
1.5.1 叶绿素含量的测定
1.5.1.1 实验试剂
纯丙酮,80%丙酮,碳酸钙,石英砂
1.5.1.2 操作步骤
(1)取样:取新鲜叶片,剪碎,称取0.25g左右,放入研钵中,加入纯丙酮5mL,少许碳酸钙和石英砂,研磨成匀浆,再加入80%丙酮5mL,继续研磨至组织变白,在暗处静止3~5min后,用一层干滤纸过滤到25mL容量瓶中,用滴管吸取80%丙酮,将洗净研钵和周围色素过滤到容量瓶中,待滤纸和残渣全部变白后,用80%丙酮定容至刻度。
(2)吸光度测定:取上述色素提取液1mL,加80%丙酮4mL稀释后转入比色杯中,以80%丙酮为空白,分别测定OD663、OD645和OD652值。
1.5.1.3 结果计算
叶绿素a、b含量用以下公式:
Ca=12.7×OD663-2.69×OD645
Cb=22.9×OD645-4.68×OD663
已知,叶绿素a和b的80%丙酮提取液在652nm处有相同的比吸收系数。因此,叶绿素的总量(CT)计算有两种方法,即:
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