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    2. 材料与方法
    2.1 原料与试剂
    苹果、梨、香蕉、橙子。
    没食子酸标准品:山海国药集团化学试剂有限公司。
    2.2 主要仪器与设备
    水浴锅;电子天平;752型紫外可见分光光度计;量筒;烧杯。
    2.3 方法
    2.3.1水果浆汁的制备
    将水果洗净、晾干,取可食用部分切碎,组织捣碎机匀浆。取试样适量(均取5g匀浆),用80mL蒸馏水洗入100mL容量瓶中,定容,放在100℃沸水中水浴保温30min,取出,冷却至室温,过滤,滤液备用。
    2.3.2 福林(FC)试剂的配制
    精密称取100.00g钨酸钠(Na2WO4•2H2O)和25.00g钼酸钠(Na2Mo4•2H2O)于2000mL圆底烧瓶中,加入700mL蒸馏水、85%浓磷酸50mL和浓盐酸100mL,充分混匀,以小火回流10h,再加入150.000g硫酸锂(Li2SO4•H2O)、50mL蒸馏水和几滴溴水。开口继续煮沸15min,使得溴水完全挥发。待溶液冷却并定容到1000mL,过滤并置于棕色瓶中冰箱低温放置可长期使用,使用前稀释1倍。
    2.3.3 没食子酸标准品溶剂和波长的确定
    精确称取20mg干燥没食子酸标准品2份,分别以蒸馏水和80%丙酮为溶剂,完全溶解后定容至100mL,配制成0.2mg/mL。吸取1mL分别加入FC试剂2mL,20%碳酸钠溶液10mL,定容至25mL,40℃避光反应1.5h。以蒸馏水为空白,分别于730、760、765、770nm处测定吸光度值。
    2.3.4 显色条件的确定
    (1) 显色温度的确定:
    以上述确定的溶剂配制0.2mg/mL的没食子酸标准溶液,取6份,每份1mL,按照上述实验方法,固定其他实验条件(FC试剂2mL,20%碳酸钠溶液10mL,避光反应1.5h),分别在30、40、50、60、70、80℃下反应,测定相对的吸光值,以比较不同反应温度对吸光度的影响;
    (2) 显色时间的确定:
    同上取没食子酸标准溶液6份,每份1mL,按上述实验方法,固定其他实验条件(FC试剂2ml,20%碳酸钠溶液10ml,40℃,避光),分别反应0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0h测定吸光度值,以比较不同显色时间对吸光度的影响;
    (3) FC试剂用量的确定:
    同上取没食子酸标准溶液6份,每份1ml,按照1.2.1所述实验方法,固定其他实验条件(20%碳酸钠溶液10ml,于40℃避光反应1.5h),分别加入FC试剂0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml,测定吸光值,以比较FC试剂用量对吸光度的影响;
    (4) 20%碳酸钠用量的确定:
    同上取没食子酸标准溶液6份,每份1ml,固定其他实验条件(FC试剂2ml,40℃避光反应1.5h),分别加入20%碳酸钠溶液2、4、6、8、10、12ml,测定吸光值,以比较20%碳酸钠溶液用量对吸光度的影响。
    2.3.5 标准曲线的建立
    准确量取上述标准液0、0.5、1、1.5、2、2.5、3mL于50mL容量瓶中,按2.3.4中测定的结果来加入相应的FC试剂和20%碳酸钠溶液,用蒸馏水定容,按2.3.3中测定的波长下来测定吸光度,以吸光度为纵坐标,标准溶液浓度为横坐标,绘制标准曲线。
    2.3.6 样品的测定
    用移液管精确量取制备好的样品溶液0.5mL于50mL容量瓶中,加入30mL蒸馏水,摇匀,按2.3.4中测定的结果加入相应的FC试剂,Na2CO3溶液,用水定容至刻度,混匀,水浴反应,冷却后在2.3.3中测定的波长下测定其吸光度。
    2.3.7 重复试验
    将四种水果按照上述的步骤重复做两次,并分别记录数据。
    3. 结果与分析
    3.1 没食子酸标准品溶剂和测定波长的确定
    Table 1 Establishment of Solvent for gallic acid and wavelength on absorbency in determination
    Wavelength(nm)    Absorbency
        Distilled water    80%Acetone solution
    730    1.036    1.039
    760    1.041    1.044
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