GASBD基因在马铃薯中的表达对淀粉的合成及理化性质的影响(3)_毕业论文

　

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1.2.4 表观直链淀粉含量的测定

采用双波长比色法[6]对表观直链淀粉的含量进行测定。双波长的确定：取1mL直链淀粉标准溶液(1mg/mL)或2mL支链淀粉标准溶液(1mg/mL)，先加入适量去离子水，用0.1M 盐酸将溶液pH调节至3.5左右，再加入0.5mL的碘试剂，用50ml容量瓶定容。静置20min后，对直链、支链淀粉样品进行可见光全波段扫描。通过作图法确定测定波长λ1为560 nm，参比波长λ2为515 nm。

直链淀粉标准曲线的制作：分别吸取1mg/mL的直链淀粉标准溶液0.5、1、1.5、2、2.5、3mL于50mL离心管中，加入适量的去离子水，用0.1M盐酸溶液将溶液pH调节至3.5左右，再加入0.5mL的碘试剂，用50mL的容量瓶定容。静置20min，分别在560 nm(λ1)和515 nm(λ2)处测定不同浓度直链淀粉的吸光值Aλ1和Aλ2。然后以直链淀粉含量(mg)为横坐标，以吸光度差值△A = Aλ1–Aλ2 为纵坐标，绘制直链淀粉标准曲线。标准曲线的回归方程为y=0.0278x-0.0006，R2=0.9995。来!自~751论-文|网www.751com.cn

表观直链淀粉含量的测定：取3.75mL的转GASBD基因淀粉溶液(1mg/mL)置于离心管中，加入适量的去离子水，用0.1M 盐酸将溶液pH调节至3.5左右，加入0.5mL的碘试剂，用50mL容量瓶定容。静置20min后，以不加碘试剂的淀粉液作为对照，分别测转GASBD基因淀粉溶液在560 nm(λ1)和515 nm(λ2)处的吸光值。每个样品重复实验3次。

1.2.5 淀粉糊化性质的测定

采用RVA-3D型的快速粘度分析仪，对加热过程中的淀粉糊化性质进行分析[7]。分析步骤为：准确称取2 g的干淀粉样品，用去离子水将干淀粉配成浓度为8 g/100mL的淀粉乳。设定RVA的分析程序为：在10s内将转速由960r/min下降至160r/min并保持恒定，在50℃的条件下保温1min，在3.75min内以12℃/min的速度将温度从50℃上升至95℃，在95℃的条件下保温2.5min，在3.75min内以12℃/min的速度将温度从95℃下降至50℃，在50℃的条件下下保温2min。RVA的特征值主要包括峰值粘度(peak viscosity)、回生值(setback)、糊化温度(pasting temperature)等。每个样品重复测定3次。

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