低pH对小麦氮代谢基因表达差异的影响分析(3)

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硝酸还原酶具有氧化还原性，可以催化硝酸根离子还原称为亚硝酸根离子。硝酸还原酶可以分为同化型还原酶，和异化型还原酶。两者的区别在于，前者参与硝酸盐的同化，而后者则催化作为活体氧化的最终电子受体的硝酸盐。同化型还原酶存在于多种细菌、高等植物、藻类体内，是内部含有电子传递体的复合体。异化型酶存在于一些兼性好氧细菌体内，多为与膜结构相结合的不溶性酶。硝酸还原酶是一种诱导酶，可由硝酸盐诱导，也可以被氨和有机氮抑制[8]。

谷氨酰胺合成酶基因(GS)经过转录、翻译后形成谷氨酰胺合成酶。

谷氨酰胺合成酶能够把无机盐形式的氨催化同化成有机氮形式。谷氨酰胺合成酶催化氮素同化的第一步反应，在氮素同化中起着至关重要的作用[9]。在高等植物体内，一般GS以两种同工酶形式存在。一种是胞质（胞液）型GS（GS1），主要功能是同化内源性蛋白和氨基酸分解代谢产生的氨，参与种子萌发时储存氮源的转运，以及叶片衰老是氮源的转移再利用。另一种是定位于叶绿体中的叶绿体型GS（GS2），主要参与光呼吸氨、硝酸还原产生的氨、循环氨的再同化[10]。

谷胱甘肽硫转移酶基因(GST)经过转录、翻译后形成谷胱甘肽硫转移酶。

谷胱甘肽硫转硫酶是广泛分布于各种生物体内的一组多功能同工酶,能够催化GSH的巯基与内源性或者外源性物质的亲电子基团结合，增加基团的疏水性，使其更易穿越细胞膜，排出体外，从而能够解毒[11]。

2 材料与方法

2.1 材料的培养与处理

选择籽取饱满的小麦种子, 用纱布包好, （75%乙醇灭菌30 s，无菌水冲洗3遍，10%次氯酸钠消毒10 min，无菌水冲洗6遍之后取出置于垫有双层滤纸的大号培养皿中, 在30±1℃恒温下催芽。选取露白一致的种子,将种子均匀播撒在纱网上, Hoagland营养液培养，光照培养箱内温度保持在20℃-22℃每天光照12 小时，光照强度400 μmol m-2 s-1。培养期间，每2天更换一次营养液。培养5天后选取长势一致的幼苗开始酸化处理，其中对照组继续使用Hoagland营养液培养，酸化处理组则改为酸化处理也进行，处理液为用HNO3调节Hoagland营养液到pH 3.0，处理2周后取样，分1g包装与锡箔纸中，液氮速冻，保存于-70℃超低温冰箱备用。来`自^751论*文-网www.751com.cn

2.2 仪器与药品

2.2.1 主要仪器设备

pH计、移液枪、冷冻离心机、恒温水浴锅、荧光体显微镜、紫外分光光度计、实时荧光定量PCR仪

2.2.2 主要药品

氯化铝、氯化钙、丙酮、无水乙醇、硝酸、考马斯亮蓝G250、牛血清蛋白（BSA）、GSH测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）、硫代巴比妥酸（TBA）、磷酸钾、碘化钾、Tris-Mes、、氧化型谷胱甘肽（GSSG）、还原型谷胱甘肽（GSH）、还原型辅酶Ⅱ（NADPH）、1-氯-2,4-二硝基苯、RNA Trizol（Invitrogen）、DEPC、氯化钠、氯化锂、三氯甲烷、dNTP（Takara）、RNase、3’ adaptor、反转录酶（M-MLV RTase）、5×M-MLV buffer等。