不同转化溶液对根癌农杆菌感受态细胞转化率的影响

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摘要：农杆菌介导法是一种优秀的遗传转化方法，该法的重要前提是将目标基因转入农杆菌中，而感受态的制备是该过程的关键步骤。本实验以根癌农杆菌为受体细胞，在培养基与保存方法不变的情况下，研究不同转化溶液对根癌农杆菌感受态细胞转化率的影响，筛选出最高效的转化条件。通过计数菌落数计算出转化子数，最后得出转化率进行比较。得出结论转化溶液为Ca2+联合Mg2+作转化溶液时能够使转化率升高，在40 mmol/L CaCl2，10 mmol/L MgCl2作为转化溶液时，转化率最高。70578

毕业论文关键词：根癌农杆菌，感受态细胞，转化率

Abstract: Agrobacterium-mediated transformation is an excellent method of genetic transformation. The most important prerequisite of this method is to transfer out target gene into Agrobacterium, whose key step is the preparation of competent cells of Agrobacterium. This thesis is to establish a method to produce competent cells of Agrobacterium tumefaciens with high transformation efficiency by study the effects of different transformation solutions on transformation efficiency of competent cells with the same growth medium and preservation methods.The transformation efficiency was determined by counting the number of transform. The results show that transformation solution with 40 mM Ca2+ and 10 mM Mg2+ gives the highest transformation efficiency.

Key words: agrobacterium tumefaciens ,competent cell ,transformation rate

1 引言 4

2 材料方法 6

2.1 材料 6

2.2转化溶液的制备 6

2.3保存溶液的配置 6

2.4 制备步骤 6

3结果 7

3.1转化子数 7

3.2转化率 8

结论 10

参考文献 11

致谢 13

1 引言

近些年来由于经济的发展，人口的增长，导致环境和气温的变化越来越不适应传统农产作物的生长，为了庞大的70亿人口健康生活，农产作物的质量与数量必须大大的提高。因此从20世纪以来，越来越多的科学家投入农业的科学发展中，为人类事业贡献自己的力量[1]。

农业科学包括植物保护，植物生产，种子技术等，尤其侧重于种子技术，从根本上转化其遗传信息，以便提高质量[2]。关于种子技术就是其遗传技术，也就是通过转化基因，改变遗传信息，并使其稳定的遗传下来[3-5]。

自从植物基因工程的成立以来，中外科学家们利用转基因技术实验设计出许多高质量，高产量的产物，取得了相当瞩目的成就。特别是自从Horsch等人在1985年用农杆菌介导的方法转化了烟草叶盘，在基因转化技术中农杆菌介导法开始被广泛应用，并得到许多成功产物，以棉花为例如抗虫棉，彩色棉等[6-7]。而感受态细胞的制备与转化作为最基本的植物基因工程实验技术之一也得到了快速的发展。文献综述

农杆菌介导法是利用菌体侵入植物细胞中，将菌体中质粒上的T-DNA插入到植物DNA序列中，通过植物染色体数目减半的分裂方式进行有性生殖，同时其被改变的基因稳定遗传下来。提高制备感受态细胞的数量与质量能够使农杆菌介导法的成功率显著上升。近些年来研究感受态细胞制备的科学人员很多，方法也很多但却大多针对于大肠杆菌感受态细胞培养，二对于根癌农杆菌研究相对较少[8-11]。