本实验使用的肝癌细胞是SMMC-7721,购买于中国科学院上海细胞库。
木犀草苷(批号:025-120622,纯度为99.7%,从成都中草药有限公司购买)是从药用植物秦艽中分离出来的一种天然黄酮类化合物。使用前用浓度为20 mM的二甲基亚砜溶解,储存在零下20oC的冰箱中,在每次实验前需用缓冲溶液稀释。在本研究中,二甲基亚砜的终浓度不得超过0.1%。
2.2细胞增殖实验
本次实验采用Cell Counting Kit-8(简称CCK-8)方法,检测肿瘤细胞增殖变化。该实验方法基于一种类似于MTT化合物的WST-8化学成分,其能被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色Formazan,以便进行细胞增殖的检测[6]。该试剂拥有操作简便、结果检测分析灵敏精确、对细胞毒性小等特点。来!自~751论-文|网www.751com.cn
2.2.1不同浓度的木犀草苷对肝癌细胞增殖的影响
实验准备:对96(8×12)孔板8条进行1-8编号,配制浓度分别为25 μM、50 μM、100 μM、200 μM的木犀草苷待用,制备SMMC-7721细胞悬液。
实验过程:将SMMC-7721细胞悬液加到96孔板中(1-5条),每孔100 µL(约1000个细胞),将培养板放置在培养箱中培养24 h(37oC、5% CO2条件下)。在培养板的2、3、4、5条中,加入100 µL已配置好的不同浓度的木犀草苷,孵育48 h(第一条为对照组),再在每孔中加入10 µLCCK-8溶液,放置培养箱培养1-4 h。用酶标仪测定在450 nm处的吸光度值[6]。
2.2.2不同时间木犀草苷对肝癌细胞增殖的影响
实验准备:分别对5块96孔板进行1-5编号,配置浓度为75 μM的木犀草苷,制备SMMC-7721细胞悬液。