新型可注射水凝胶软骨再生支架的制备(5)

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2.2 琥珀酰壳聚糖（SCS）的合成

0.5g壳聚糖溶解在40ml 5%（v/v）乳酸溶液，然后加入160ml甲醇溶液来稀释溶液。1.5g丁二酸酐被添加到该溶液，在室温搅拌。24小时后，通过调节溶液pH 6~ 7使沉淀琥珀酰壳聚糖改性。滤出沉淀物，再溶解于水，经过3天透析。纯化后的产物进行冻干保存于4oC。由茚三酮法确定SCS取代度为38%。

2.3 甲基丙烯酸酯化壳聚糖的合成

基丙烯酸（MA）接枝到SCS上。0.5g SCS溶解在150毫升纯净水中，配置成溶液。接枝MA在SCS，50ml 纯净H2O中加入8005 µL MA（9.4mol）和400mg EDC在4oC中培养48h。在搅拌下把MA/EDC溶液加入到SCS溶液。混合物在室温透析12h（截留分子量为10,000）后冻干（- 50 oC）。

2.4 聚乙二醇二甲基丙烯酸酯的合成

在24h，4oC条件下，通过使甲基丙烯酰氯对PEG三乙胺存在下在二氯甲烷经乙醚沉淀，首先合成了PEG二甲基丙烯酸酯大分子单体。聚乙二醇二甲基丙烯酸酯溶解，在二氯甲烷、乙醚下沉淀三次，以去除杂质。本研究中，在PEG大分子单体中甲基丙烯酸酯的接枝率达到95%，纯度＞99%。来!自~751论-文|网www.751com.cn

2.5 SCS/ PEG水凝胶的制备

在紫外线下照射1h，以达到对甲基丙烯酸酯化的SCS消毒。然后溶于无菌磷酸盐缓冲盐水（PBS，pH= 7.4）获得10mg／ml溶液。聚乙二醇二甲基丙烯酸酯大分子单体溶解在PBS中最终浓度为10%（W / W）。聚乙二醇二甲基丙烯酸酯溶液的消毒过滤通过一个0.2µM注射器过滤器。在制备凝胶中，将SCS溶液或无聚乙二醇二甲基丙烯酸酯溶液注入1.5ml离心管。SCS:PEG的重量比分别为100:0、90:10、70:30。紫外线光引发剂，Irgacure 2959，增加了重量的最终浓度为0.05%。在37oC孵育30分钟后，含光引发剂的大分子单体在一个功率~10mW/cm2，365nm的紫外线光下照射15分钟。所形成的水凝胶被分别指定为SCS、SCS/PEG-10和SCS/PEG-30。