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摘要：本文对一株枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶的发酵培养基配方及发酵条件进行了优化，采用单因素试验和多因素正交试验确定了最优的发酵培养基配方及最优发酵条件并得出以下结论。通过对比实验可以发现经过反复平板划线分离的菌株产酶能力有所提高。最优化的培养基配比是最优碳源为葡萄糖，添加量为10g/L,最优氮源为蛋白胨，添加量为8g/L，生长因子的添加量为0.2%。通过实验比较发现，最优发酵条件为装液量100mL/250mL,转速200r/min，初始pH值为7.2，发酵周期为24h，接种量4%，发酵温度36℃。20517
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关键词：枯草芽孢杆菌；中性蛋白酶；培养基；发酵条件
Study on Fermentation Process of Neutral Protease by Bacillus subtilis
Abstract: This paper focused on the optimization of culture medium and fermentation conditions of neutral protease produced by bacillus subtilis. Mono-factor experiment and orthogonal tests were undertaken to obtain the suitable culture medium and fermentation conditions as follows: Through the contrast experiments can be find that Tablet repeatedly crossed separation strains enzyme production capacity increased. Glucose 8g/L, peptone 6g/L, amount of growth factor is 0.2%，liquid level 100mL/250mL, shaker revolution 200r/min, initial pH7.2, fermentation period 48h, inoculation size 4%,culture temperature 36℃.
Key words: bacillus subtilis; neutral protease; culture medium; fermentation condition
目 录
1.绪论 1
1.1.国内外研究概况 1
1.2.中性蛋白酶的简介及应用范围 1
1.3.枯草芽孢杆菌的应用背景 2
1.4.课题研究的意义和目的 3
2.实验材料与方法 5
2.1.使用的材料试剂及仪器设备 5
2.2.实验方法 5
2.2.1 实验流程 5
2.2.2 平板划线分离筛选最优菌落 5
2.2.3 三点接种 6
2.2.4 发酵培养基优化 6
2.2.5发酵条件优化 6
2.2.6 单因素优化实验 6
2.2.7 多因素正交试验 6
2.2.8方差分析 7
2.2.9 Folin酚法测定蛋白酶活力 7
2.2.10 DNS法测定总糖含量 8
3.实验结果及分析 9
3.1.菌种活化 9
3.2.酪蛋白标准曲线的制作 9
3.3.发酵培养基优化 10
3.3.1.不同碳源对枯草芽孢杆菌产酶能力的影响 10
3.3.2.不同氮源对枯草芽孢杆菌产酶能力的影响 11
3.3.3.培养基碳、氮源配比的确定 11
3.3.4.不同无机盐对枯草芽孢杆菌产酶能力的影响 12
3.3.5.不同生长因子添加量对枯草芽孢杆菌产酶能力的影响 13
3.4.发酵条件优化 13
3.4.1.生长曲线 13
3.4.2.不同温度对枯草芽孢杆菌产酶能力的影响 15
3.4.3.不同起始pH值对枯草芽孢杆菌产酶能力的影响 16
3.4.4.不同装液量对枯草芽孢杆菌产酶能力的影响 16
3.4.5.不同转速对枯草芽孢杆菌产酶能力的影响 17
3.4.6.不同接种量对枯草芽孢杆菌产酶能力的影响 18
3.4.7.发酵条件的正交试验研究 18
4. 结论...20
致谢 .21
参考文献 .22
1.绪论
1.1 国内外研究概况
1.2 中性蛋白酶的简介及应用范围
中性蛋白酶是由枯草芽孢杆菌经发酵提取而得的，属于一种内切酶，可用于各种蛋白质水解处理。在一定温度、PH值下，本品能将大分子蛋白质水解为氨基酸等产物。可广泛应用于动植物蛋白的水解，制取生产高级调品和食品营养强化剂的HAP和HVP，此外还可用于皮革脱毛、软化、羊毛丝绸脱胶等加工。