图1.1 索拉胶结构式
该多糖被命名为索拉胶(Salecan)。
索拉胶是一种白色或浅黄色粉末,无色、无臭、无毒,具有良好的水溶性,食用安全且具有预防便秘、调节肠道菌落、降低餐后血糖血脂、减轻酒精或四氯化碳引起的急性肝损伤等医学价值。但由于其分子量大,增稠性强,溶解后粘度大而不利于实际应用,所以通常会将其水解制成β-葡寡糖用于医药应用研究。
β-葡寡糖是多种病原真菌和细菌等微生物的细胞壁主要成分[16],用以文持细胞膜完整性并保护细胞质抵抗环境压力,同时也是植物体内重要的信息物质之一,调节着植物的代谢与生长。在实际应用中,β-葡寡糖能够模拟病原菌的功能诱导植物的防卫反应,激活植物的自我防御系统,因此通常被用作研究植物防卫反应的病原激发子。有研究表明,经低聚合度的热凝胶寡糖处理后,烟草植物细胞内产生快速响应,并对烟草花叶病毒产生一定性[13]。而250 mg/L的β-1,3-葡五糖能够显著提高土豆植株应对致病疫霉(Phytophthora infestans)的抗性[14]。
早期实验证明水解索拉胶制成寡糖时,采用酸水解方法无法得到特定聚合度范围的寡糖,且效率低下。而利用类芽孢杆菌S09在产酶培养基Hty中生产的特异性内切β-葡聚糖酶SalA去水解索拉胶,能得到特定聚合度范围的寡糖,水解产物单一,且水解效率较酸水解要高。
综上,制备索拉胶寡糖可利用土壤杆菌Agrobacterium sp. ZX09对蔗糖发酵合成索拉胶,再使用特异性内切β-葡聚糖酶SalA对索拉胶进行水解,生成索拉胶寡糖作为后续植物抗性效果分析的激发子。
1.4 研究工作的发展和应用前景
随着分子生物学时代的到来,人们对于生物的研究由宏观到微观快速推进。过去的一些年里,植物分子病理学不管是在在理论体系的研究方面、关键现象的解释方面、还是研究技术的创新方面都取得了不错的成绩,植物分子病理学也成为植物生物学前沿、热点领域之一。
植物诱导抗病性的研究不仅可以揭示植物和病原微生物之间动态而复杂的相互关系,具有十分重要的理论价值;而且在其基础上进行的植物基因改造技术与新型品种培育对植物病害的防治与农业的发展也具有重要的应用价值。
2 材料与方法
2.1 实验仪器和材料
2.1.1 实验仪器
恒温培养箱 摇床
植物培养箱 PH计
分光光度计 烘箱
超净工作台 离心机
恒温水浴锅 灭菌锅
漩涡振荡器 PCR仪
移液枪 流变仪
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