- 上一篇：APECO78前噬菌体蛋白的重组表达及血清制备
- 下一篇：蓖麻CKX基因家族生物信息学分析
3.2.4 组织病理学分析 11
3.2.5 小鼠肝脏总RNA的抽取 12
3.2.7 荧光定量PCR 13
3.2.8 统计方法 13
3.3 结果与讨论 14
3.3.1 索拉胶寡糖对四氯化碳引起的急性肝损伤的影响 14
3.3.2 索拉胶寡糖对肝脏内抗氧化基因表达的影响 15
3.3 本章小结 17
结 论 18
致 谢 19
参考文献20
1 绪论
1.1 寡糖的定义
寡糖又称低聚糖，和多糖相比没有明显界限，通过糖苷键连接的单糖元个数一般在2-10或2-20[1]。寡糖保留了多糖的生理活性，但相比于多糖，寡糖有分子量均一、结构明确等优点，在医药、畜牧业、食品等领域有广泛的研发价值。
1.2 寡糖的分类
寡糖作为一种低分子聚合物，其分类方法十分多样[1]。根据寡糖的组成成分是否是同一种单糖可分为同寡糖和杂寡糖。由不同的单糖组成的为杂寡糖，由相同的单糖组成的为同寡糖。还原性寡糖和非还原性寡糖的区分依据是游离的半缩醛羟基是否存在于寡糖分子中[2]。普通寡糖和非消化寡糖的区分依据是寡糖的生物学功能 [3]。一般哺乳动物分泌的消化酶只具有消化α-（1,4）-糖苷键的能力。普通寡糖又称为营养性寡糖，包括蔗糖、麦芽糖、乳糖等，其结构中有大量α-（1,4）-糖苷键，可以被机体吸收用作能量物质，但无法促进肠道有益菌的生长，不具有特殊的生理学功能。非消化寡糖又称为功能性寡糖，包括果寡糖、低聚木糖、大豆低聚糖等，其结构中不含有α-（1,4）-糖苷键，无法被机体自身的消化酶类水解吸收，但具有多种生理功能，如改善肠道菌群，促进机体肠道益生菌（主要包括双歧杆菌和乳酸杆菌等）在肠道内的增殖。研究表明寡糖还可以利用肠道的黏膜免疫系统调节并增强机体的免疫能力[4 5]。
1.3 寡糖的制备方法
寡糖具有多种功能，应用广泛，推动了寡糖的生产。但自然界中寡糖含量有限，寡糖的大规模来源途径从天然产物中提取转移到利用化学方法合成、酶催化合成和多糖水解[6,7]制备。
寡糖类物质分布广泛，主要存在于多数植物的根茎、果实和种子中。可以用水提法、微波提取法、有机溶剂抽提法、超声波提取法、射频法等方法提取天然寡糖[1]。但天然产物中寡糖的浓度较低，杂质太多，增加了操作难度。
化学合成法中最常用的是糖苷键合成法，由Koenigns和Knorr于1901年创立，其缺点是反应稳定性差，反应产率低[8]。1980年Schmidt等创建了三氯乙酰亚氨酰法，至今没有被超越，是现代寡糖合成的首选方法，该方法具有较好的产率和立体选择性[9]。寡糖的化学合成方法操作步骤繁琐，很难控制生成的结构，得到的产品纯度不高，生产成本较高，不利于大规模生产。
酶催化合成寡糖的特点是立体特异性强，对反应底物、糖苷键的类型及位置等均有特定要求[10]。同时避免了复杂的化学反应。用于合成寡糖的酶包括磷酸化酶、糖苷水解酶及糖基转移酶等3大类[11]。
目前应用最广泛的方法是用多糖水解制备寡糖，其中传统的主要是化学降解法和酶解法。化学降解法包括酸水解和碱水解，对反应条件要求较高，而且生成产物纯度低，后续处理困难。在化学降解法的基础上衍生出来过氧化氢法等，有更强的操作可行性。此外，还有简单快速的物理法可以制备寡糖。化学降解法生产成本低、技术成熟、反应机理明确，但生产的产物产量低，纯度不高，后续分离纯化困难，工业化程度不高。物理降解法操作简单，反应迅速，无缓解污染，具有工业化生产的潜力。酶解法生成寡糖反应条件最为温和，底物专一性强、产量交高，是目前制备寡糖的主要方法。不同方法制备的寡糖结构有差异。以褐藻胶为例，化学降解法会发生β消去反应；利用过氧化氢处理褐藻胶导致糖链明显减短, 并在C-1 还原端形成醛基；辐射法更容易得到相对分子质量较低的褐藻胶寡糖；酶解法通过β-（1,4）消去反应降解褐藻胶，并在非还原端形成一个不饱和糖醛酸残基[12]。