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摘要：本实验旨在采用常规的real time PCR 技术来研究分析徐淮山羊胎羊中八种不同组织（背肌、腿肌、心、肝、脾、肾、肺、肠）miRN-543表达差异性。实验操作是首先提取徐淮山羊胎羊中八个组织总的RNA，利用miRNA-543特异性引物逆转录成cRNA，再利用Real-time PCR 检测徐淮山羊胎羊中miRNA-543在八个不同组织中的表达水平。实验结果表明：miRNA-543 在肌肉组织中的表达水平最高，在肾，肠、心脏也发现有miRNA-543 的高水平表达，而在肝、脾、肺等淋巴组织中的表达水平最低；miRNA-543 在徐淮山羊胎羊的各组织表达水平依次为腿肌（3.0193）、心肌（1.0238）、背肌（1.0000）、脾(0.3828)、肠(0.3512)、肾(0.1486)、肺(0.0304)、肝(0.0073)。结论：使用Real-time PCR方法成功检测到miRNA-543在山羊胎羊八个组织中的表达，此结果可为今后山羊microRNA的研究提供实验基础和理论依据。37897
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毕业论文关键词：miRNA-543；miRNAs；表达；山羊
The expression study of miRNA-543 in different fetal goat organs
Abstaact: This experiment aims to adopt the conventional Real-time PCR technology to study Xu Huai goat fetal in eight different organizations (back muscle, leg muscle, heart, liver, spleen, kidney, lung, intestine) miRNA-543 express differences. Experimental operation is first extracted Xu Huai eight organization total RNA in fetal goats, goats use the miRNA-543 specific primers retrovirus into cRNA, reuse Real - time PCR detection of microRNA-543 in Xu Huai goat fetal expression level in eight different organizations. The experimental results show that the miRNA-543 the highest expression level in the muscle tissue in the kidney, intestine, heart, also found that the high level expression of microRNA-543, and in the liver, spleen, lung and other lymphoid tissue expression level of the minimum; The miRNA-543 in Xu Huai groups of goats and goat foetuses expression level of leg muscle (3.0193), myocardial (1.0238), back muscle (1.0000), spleen im (0.3828), (0.3512), kidney (0.1486), lung (0.0304), liver (0.0073). Conclusion: the use of Real-time PCR method successfully detected the miRNA-543 in goat fetal eight expression in the organization, and the results can provide experimental basis for goats miRNA in future research and theoretical basis.
Key words: The miRNA - 543; miRNAs. Express; The goat
目 录
引言 1
1材料与方法 2
1.1材料 2
1.1.1组织来源 2
1.1.2 实验仪器设备 2
1.1.3 实验化学药瓶及试剂 3
1.2 实验方法 4
1.2.1 实验引物设计 4
1.2.2 RNA提取 4
1.2.3样品质量检测 4
1.2.4 合成cRNA 5
1.2.5 引物设计原理 5
1.2.6 样本的扩增及凝胶成像 5
1.2.7 荧光实时定量PCR 6
1.3统计方法 6
2结果与分析 7
2.1 样品凝胶电泳检测 7
2.2 荧光定量PCR中的各对引物的熔解曲线 7
2.3 心 肠 脾三组织miRNA扩增曲线 8
2.4 miRNA-543 在山羊胎羊不同组织中的表达量 9
3讨论 9
致谢 10
参考文献 11
引言
中国是山羊饲养历史最为悠久的国家，在中国古代的夏商时期就已经有相关文字记载。在中国，山羊的饲养规模大概在1000多年前兴起。而山羊具有一些非常好的生产上的优点，比如繁殖率非常高，对环境的适应性强，在饲养过程中很容易进行饲养管理，现在已经在中国大范围饲养。新中国成立以来，尤其是改革开放以后，中国的山羊养殖可以说是达到了空前的规模，饲养面具逐年增加。中国是一个山区大于平原的国家，对饲养羊具有先天优势。在南方有些地方不适合饲养绵羊，但是适合喂养山羊。利用一定的生物学手段，加上认为的正确干预，可以在一定程度上提高山羊的生产性能，从而提高生产效益。山羊机体中与生产性能相关的组织器官由基因调控表达，对于基因水平的研究对于提高山羊生产性能有很大的帮助。