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怀牛膝皂苷提取工艺及抗氧化活性研究
引言
怀牛膝，多年生苋科草本植物[1]。主产于古称怀庆府的河南博爱、沁阳、温县、武陟等地，是“四大怀药”之一。怀牛膝质量远高于在四州、湖北、陕西等省出产的牛膝，数量也居全国之首。怀牛膝具有强腰膝、补益肝肾[2]以及活血、引血下行的作用。皂苷是怀牛膝的主要活性成分之一，苷元为齐墩果酸。牛膝皂苷具有抗炎镇痛[3]、心血管药理作用、抗肿瘤及抗生育[4]等药理作用，国内厂家及医院及各市场需求较大，人工栽培怀牛膝效益较好。
微波提取是近年来随着科技的发展而新兴的提取方法，微波提取利用了介电加热和离子传导的作用，使破裂的细胞形成孔洞，溶剂容易进入植物，使成分溶解扩散。较以往的浸提方法，微波提取具有提取速度快、提取充分、收率高[5]的优点。超氧阴离子自由基和羟自由基是生物体内常见的自由基，正常生理状态下，其消除和产生文持动态平衡。但是，过多的自由基会使细胞功能受损，甚至基因突变引发癌症[6]。怀牛膝皂苷提取液对其有清除活性。
本实验以人工栽培怀牛膝根为主要材料，采用微波辅助提取法，通过单因素试验研究料液比、乙醇浓度、微波处理时间、微波功率对怀牛膝皂苷提取率的影响，且通过正交试验筛选怀牛膝皂苷的最佳提取工艺条件[7]，并比较野生怀牛膝根、花和叶皂苷含量。同时测定了提取液对超氧阴离子自由基和羟自由基两种自由基的清除率，研究怀牛膝皂苷的体外抗氧化活性。为进一步开发和利用怀牛膝皂苷提供理论依据。
1 实验部分
1.1 实验所用材料、试剂及仪器
材料：人工栽培怀牛膝根、野生怀牛膝根、花、叶片，购于同和堂大药房。低温烘干，粉碎备用。
试剂：邻苯三酚、无水乙醇、高氯酸、冰乙酸、三羟甲基氨基甲烷、氢氧化钠、盐酸、邻二氮菲、硫酸亚铁、30%过氧化氢、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、蒸馏水。
仪器：AR124CN电子天平（奥豪斯仪器有限公司）；SH2-D(Ⅲ) 循环水真空抽气泵（郑州市亚荣仪器有限公司）；ZBE70-35制冰机（Ziegra-Eismaschinen GmbH）；DHG-2150B电热鼓风干燥箱（郑州生元仪器有限公司）；D8028TL-K4C格兰仕微波炉（格兰仕集团有限公司）；HH-S4恒温水浴锅（巩义市予华仪器有限责任公司）；KQ-B玻璃仪器气流烘干器（巩义市予华仪器有限责任公司）；V-5000可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）。
1.2 实验方法
1.2.1 皂苷测定
1.2.1.1 标准液的配制
以齐墩果酸作为标准品，精密称取干燥至恒重的齐墩果酸对照品10 mg置于烧杯中，以无水乙醇溶解，转移至10 mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀即浓度为1 mg/mL的标准对照液。