大肠杆菌表达异源纤维素酶(2)

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纤维素酶是一类能降解纤维素并生成葡萄糖的酶的总称，在自然界中广泛存在 [6]。细菌、真菌和动物等体内都能产生相应的纤维素酶[7]。细菌纤维素酶从催化功能上可以分为三类：内切β-1,4-葡聚糖酶（endo-β-1,4-glucanase EG）,随机水解非结晶纤维素内部的β-1,4-糖苷键，可以将长链的纤维素分子截成短链，并产生大量的非还原性末端的小分子纤维素；外切β-1,4-葡萄糖酶（exo-β-1,4-glucanase CBH）,又叫纤维二糖水解酶（cellobiohydrolase）,从纤维素链状分子的末尾水解β-1,4-糖苷键，依次切下一个纤维二糖分子；β-葡萄糖苷酶（β-1,4-glucosidase BGL）,可以将纤维二糖或可溶性的纤维糊精水解成葡萄糖分子用于发酵生产其他生物产品[8-10]。

1.材料与方法

1.1实验材料

1.1.1实验试材

大肠杆菌：大肠杆菌DH5α由周口师范学院发酵实验室保藏。

芽孢杆菌：四种芽孢杆菌WR2、WL11、SL16、LK1均由周口师范学院发酵实验室自主筛选并保存。

1.1.2培养基

LB固体培养基：蛋白胨1g，琼脂粉1.5g，酵母粉0.5g，氯化钠1g，蒸馏水100ml

LB液体培养基：蛋白胨1g，酵母粉0.5g，氯化钠1g，蒸馏水100ml

以上所有培养基灭菌条件：121 ℃，0.1 MPa，30 min。

1.1.3主要试剂

（1）电泳缓冲液（1×TAE）：首先配置1000ml 的50×TAE：242gTris碱，100mlEDTA(0.5mol/L)，冰醋酸57.1 ml 混匀于1000ml 的容量瓶中用蒸馏水定容至1000ml，再从中取出20 ml于1000ml 的容量瓶中用蒸馏水定容至1000ml。

(2)1%琼脂糖凝胶：称取1g琼脂糖于1000ml广口瓶中,源^自#751L文W论/文]网[www.751com.cn，再加入100ml1×TAE，微波炉加热2分钟，至无沉淀或絮状物出现为止，冷却至微微烫手即可倒入制胶槽中，然后等凝固完全后取出备用。

(3)Enzymatic Lysis Buffer：20mM Tris,PH 8.0,2 mM Na-EDTA,PH 8.0,1.2% Triton X-100 121℃灭菌处理20 min加入适量的Lysozyme(溶菌酶）其终浓度为20mg/ml。

（4）0.1M氯化钙与氯化镁混合液：称取1.11g氯化钙，2.03g氯化镁，再加蒸馏水定容至100ml容量瓶中，摇匀灭菌后备用。

（5）0.1M氯化钙：无水氯化钙1.11 g，用蒸馏水溶解，定容至100 mL容量瓶中，摇匀灭菌后备用。

（6）细菌基因组DNA提取试剂盒（Bacteriagen DNA Kit)，北京康为世纪生物科技有限公司

（7）通用型DNA纯化回收试剂盒(Universal DNA Purification Kit）北京康为世纪生物科技有限公司。

（8）Hipure Plasmid Mini Kit质粒提取试剂盒，深圳市汉普生物科技有限公司。

1.2仪器与设备

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