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摘要苦蘵(Physalis angulata)为茄科植物苦蘵的全草。草本、灌木或小乔木，浆果或蒴果，约85属3000余种，作为中医药用植物苦蘵具有清热，利尿，解毒，消肿功效[1]。查尔酮异构酶(CHI)是黄酮类代谢途径中的一个关键酶，催化分子内环化反应,使双环的查尔酮转化为有生物学活性的三环(2S)-黄烷酮[2]。查尔酮异构酶与类黄酮物质的合成有着密切联系，查尔酮异构酶转基因表达程度的研究对于提高植物类黄酮含量起到重要作用，对于苦蘵药用成分的分析鉴定及品种改良具有重要意义[3]。本研究通过生物信息学的方法，找到三个苦蘵的查尔酮异构酶基因，通过TA克隆得到了它们的全长序列，并成功构建了它们的35S超表达载体。为后续将查尔酮异构酶基因转化到苦蘵中，更好的研究该基因的生物学功能鉴定基础。51639
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Abstract Physalis angulata as solanaceae plant Physalis angulata across the grass. Herbs, shrubs or small trees, berries or capsule, about 85 genera and 3000 species, as a traditional Chinese medicine with plant Physalis angulata has clear heat, diuresis, detoxicating, detumescence effect. Isomerase chalcone (CHI) is a key enzyme in flavonoids metabolic pathways, inner ring reaction catalytic molecules, and make them into chalcone have biological activities of three-ring (2 S) - flavanone. Isomerase chalcone and material closely related to the synthesis of flavonoids, isomerase chalcone transgenic expression level of study play an important role for the improvement of plant flavonoids content, for Physalis angulata medicinal composition analysis of the appraisal and variety improvement is of great significance. This study, through the method of bioinformatics, find three Physalis angulata isomerase gene chalcone, their total length of the sequence is obtained by TA cloning, and successfully build their 35 s expression vector. For subsequent will isomerase gene into chalcone Physalis angulata, better study the biology of the gene function identification.
毕业论文关键词：苦蘵： 查尔酮异构酶； 超表达载体； 基因克隆
Key words: Physalis angulata; CHI; Super expression vector; Gene Clone.
目 录
引言 4
1 实验材料 6
1.1. 实验材料 6
1.2. 化学试剂 7
1.3. 培养基 7
1.4. 主要仪器 8
2 研究方法 8
2.1. 苦蘵不同部位总RNA提取（Trizol法） 8
2.2. RNA质量检测 9
2.3. cDNA模板的合成 9
2.4. PCR扩增目的基因 10
2.5. 目的片段的纯化回收 11
2.6. 目的片段与T-载体的连接 12
2.7. 转化与蓝白斑筛选 12
2.8. 质粒的提取 12
2.9. 质粒的鉴定及测序 13
2.10. 35S超表达载体的构建 14
3 结果与分析 15
3.1. 总RNA的提取 15
3.2. 苦蘵不同组织的RNA提取 15
3.3. 苦蘵查尔酮异构酶组织特异表达 16
3.4. cDNA质量检测 17
3.5. 克隆载体酶切结果 17
3.6. 35S超表达载体的构建 18
4讨论 18
4.1. 苦蘵中不同部位提取的RNA含量分析 18
4.2. 苦蘵查尔酮化合物可能的应用前景 19
参考文献 19
致谢 20
引言
1、 苦蘵的主要价值
苦蘵(Physalis angulata)为茄科植物苦蘵的全草，别名小苦耽、灯笼草、鬼灯笼、天泡草、爆竹草。茄科散血丹属植物 ，全株都具有药用价值。草本、灌木或小乔木。浆果或蒴果。约85属3000余种。广泛分布于全世界温带及热带地区，南美洲为最大的分布中心，种类最多。中国有24属105种，全国普遍分布，但以南部亚热带及热带地区种类较多[4]。作为中医药用植物苦蘵具有清热，利尿，解毒，消肿功效。主治：肺热咳嗽、咽喉肿痛、湿热黄疸、龈肿、感冒、痢疾、热淋、天疱疥等。近来研究表明苦職的有效药用成分还具有抗癌活性。目前，国内外关于苦蘵的学术研究较少，主要作为药用植物研究其中药化学成分。