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摘要：绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）是一种能在紫外线照射下发出强烈的绿色荧光的生物发光蛋白，存在于水母、珊瑚和水螅等腔肠动物体内。自2008年10月8日，美籍日裔科学家下村修(Osamu Shimomura)、美国科学家马丁•沙尔菲（Martin Chalfie）和美国华裔科学家钱永健（Roger Y.Tsien）三人因为发现和改造绿色荧光蛋白而获得了当年的诺贝尔化学奖以来，GFP凭借其具有稳定的荧光和构建载体方便等性质常被用来作为细胞表面展示系统的标记物，用来展示不同种类的外源蛋白，逐渐被探索应用于各种生物技术领域。本研究通过以冰晶核蛋白inaQ-N片段为载体蛋白，GFP为乘客蛋白，利用了质粒提取、引物设计、PCR扩增、凝胶电泳、DNA体外重组等技术，构建了展示GFP的大肠杆菌细胞表面展示体系，同时，对重组菌的荧光性质进行了检测，结果显示荧光效果达到预期目标。8839
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关键词：绿色荧光蛋白（GFP）；冰核基因；表面展示体系构建；荧光性质检测
The construction of cell surface display system using green fluorescent protein（GFP）
Abstract：Green fluorescent protein (GFP) is a bioluminescent protein which can issue a strong green fluorescence under UV irradiation, and present in the coelenterates’ body, such as jellyfish, coral and hydra. Since October 8, 2008, the three man, Osamu Shimomura、Martin Chalfie and Roger Y.Tsien won that year's Nobel Prize in chemistry for the discovery and transformation of the protein, GFP is often used as marker of cell surface display system to display different types of exogenous proteins by virtue of its stable fluorescent and easy to build carrier, which gradually being explored in various field of biotechnology. In this study, a cell surface display system in E. coli was constructed using the N-domain of the ice protein inaQ -N as the carrier protein and GFP as the passengers . In this study, the process of plasmid extraction, primer design, PCR amplification, gel electrophoresis and DNA reconstitution in vitro were used to achieve the recombinant bacterium. In addition, the fluorescence properties of the recombinant bacterium were evaluated. The result showed that the fluorescent effect was good.
Keywords：gfp；ice nucleation gene；the construction of cell surface display system；fluorescent effect
目 录
缩略语表 4
1 绪论 5
1.1 绿色荧光蛋白的发现与研究进展 5
1.2 绿色荧光蛋白GFP在各领域中的应用 5
1.2.1 在生物技术中的应用 5
1.2.2 在信号转导中的应用 6
1.2.3 在筛选方面的应用 6
1.2.4 在基因转染方面的应用 6
1.3 绿色荧光蛋白GFP的荧光性质及优点 7
1.3.1 荧光性质稳定 7
1.3.2 灵敏度高，易于检测 7
1.3.3 对细胞无毒害性 7
1.3.4 便于构建载体 7
1.3.5 具有广谱性 7
1.3.6 易于得到突变体 7
1.3.7 可直接用于活细胞的测定 8
1.3.8 不受假阳性干扰 8
1.2 冰核现象和冰核生物 8
1.2.1 冰核现象 8
1.2.2 冰核生物 8
1.3 植物霜冻的的形成 8
1.4 植物霜冻的危害 9
1.4.1 对园林植物的危害 9
1.4.2 对农作物的危害 9
1.5 冰核细菌与植物霜冻的关系 9
1.6 冰核细菌诱发霜冻的机理 9
1.7 冰核细菌与防霜应用 10
1.7.1 药剂防霜 10