1.2植物材料的处理
1个月后温室中的徐薯28茎蔓萌发。挑选长势一致的徐薯28,获得徐薯28茎段。徐薯28茎段标准即从茎一定部位剪下,保证剪取部分至少1个生长节点,甘薯叶2-3片。徐薯28茎段培养在加1/8霍格兰营养液和不同营养液的50 ml离心管中。将甘薯茎基部插入配置好的处理液中,每个离心管加入处理液30 ml,保证插入处理液中所有甘薯茎的第一个生长节点位置保持一致,大致在20-25 ml处。离心管用锡箔纸包裹避光,甘薯苗用棉花固定。
1.3 1/8霍格兰溶液和富氢水的制备
配置1/8霍格兰营养液所需溶液有Fe盐、NH4NO3、Ca(NO3)2、KNO3、KH2PO4、MgSO4六种。实验提供的六种植物营养液各被稀释200倍,计算配置1 L 1/8霍格兰营养液所需六种营养液各625 սl。配置1/8霍格兰营养液还需微量元素,实验微量元素被稀释1000倍,因此计算所需微量元素125 սl。实验还需1 L超纯水。
富氢水由氢气发生器制得,200 ml超纯水通入H2 30 min即为饱和富氢水(HRW)。本实验需500 ml HRW,从配置好的1 L 1/8霍格兰营养液中取500 ml,通入氢气75 min。之后用PH计分别调节500 ml 1/8霍格兰营养液和500 ml HRW的PH 5.9±1。
1.4 H2和H2S处理液配置
H2设置4组浓度梯度并用1/8霍格兰营养液稀释至所需浓度,稀释浓度分别为25 % HRW、50 % HRW、75 % HRW和100 % HRW。H2S供体硫氢化钠(NaHS)设置4组浓度梯度,分别为0.1 սM,1.0 սM,10 սM,100 սM。设置NaHS浓度梯度时,首先配置100 mM NaHS母液10 ml,之后按母液稀释所需浓度。配置100 mM NaHS需电子天枰量取NaHS固体80 mg,将固定溶解于10 ml 1/8霍格兰营养液中,摇晃使固体溶解并封盖保存于阴凉处,每天按需取用。对照组用1/8霍格兰营养液。
1.5植物生根指标的测定
从甘薯茎基部插入处理液起每隔24小时对茎基部拍照,测定每株甘薯茎基部不定根数目和每株甘薯茎基部不定根的平均长度。实验过程中每天统计完不定根数据后更换H2S和H2处理液,避免对实验准确性的影响。甘薯茎基部培养7天后,进行生根指标统计。每株甘薯苗平均不定根长度统计方式为:一株甘薯苗茎基部不定根总长度/不定根数目。不定根数目统计以肉眼可见不定根为准,不定根上的须根系不需统计。每个实验处理18个甘薯茎,独立重复3次。来!自~751论-文|网www.751com.cn
1.6数据统计与分析
所有实验数据使用Excel 2003进行处理,计算出每天不定根数量和长度的平均值。7天后统计不定根数量和长度偏差,制作出不定根数量和长度的柱状图。采用Turkey’s 检验对各处理间的差异显著性进行分析,且在P < 0.05 水平上进行差异显著性分析[13]。